犬细小病毒VP2主要抗原表位基因的密码子优化及原核表达 |
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引用本文: | 潘素敏,仲飞,贺英,史秋梅,潘素娜,崔丹,王晓燕.犬细小病毒VP2主要抗原表位基因的密码子优化及原核表达[J].黑龙江畜牧兽医,2018(19). |
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作者姓名: | 潘素敏 仲飞 贺英 史秋梅 潘素娜 崔丹 王晓燕 |
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作者单位: | 河北科技师范学院动物科技学院;河北农业大学动物医学院;河北省秦皇岛市抚宁区农牧水产局留守营动物卫生监督站;张家口市动物卫生监督所 |
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摘 要: | 为了制备大量廉价的可溶性犬细小病毒(CPV)VP2蛋白抗原,试验截选了VP2抗原表位集中的基因片段VP2-70进行密码子优化及合成,将合成基因克隆到pET-32a(+)载体中,构建原核表达载体pET-32-VP2-70,转化BL21(DE3)工程菌,IPTG诱导表达后进行Ni-NTA亲和层析纯化,Western-blot检测验证其生物学活性。结果表明:试验构建的VP2-70表达载体能够介导VP2-70融合蛋白在大肠杆菌中高效表达,表达量高出野生型VP2-70融合蛋白16 mg/L;Western-blot检测显示,该蛋白具有很好的免疫反应原性,可为CPV亚单位疫苗和免疫学诊断方法的研究提供候选抗原。
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