重组人IFNα-2b融合表达及纯化工艺研究

为了利用多分子伴侣表达载体在大肠埃希氏菌中融合表达人干扰素(IFNα)-2b,并进行IFNα-2b纯化工艺研究,试验采用人工设计并合成Smt3-IFNα-2b克隆至自行构建的P32-TrxA载体中,将重组表达质粒P32-TrxA-Smt3-IFNα-2b转化至大肠埃希氏菌(E.coil)BL21(DE3),经IPTG诱导表达、SDS-PAGE分析,在此基础上利用金属螯合层析、SUMO蛋白酶酶切、阴离子交换层析以及凝胶层析建立了IFNα-2b的纯化工艺。结果表明:重组质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确;融合蛋白分子质量约为40 ku,主要以可溶形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上;纯化的IFNα-2b分子质量约为17 ku,蛋白纯度达到95%以上,利用细胞病变抑制法测得干扰素的效价为1.0×10~8IU/mg。说明成功在大肠埃希氏菌中表达并经过简易工艺纯化了重组蛋白IFNα-2b。