靶向PRRSV的FnCas9-rgRNA敲除载体构建研究 |
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引用本文: | 赵姝灿,刘彦均,郑桂纯,肖文,傅建华,王丙云,陈志胜.靶向PRRSV的FnCas9-rgRNA敲除载体构建研究[J].黑龙江畜牧兽医,2019(3). |
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作者姓名: | 赵姝灿 刘彦均 郑桂纯 肖文 傅建华 王丙云 陈志胜 |
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作者单位: | 佛山科学技术学院 |
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摘 要: | 为了检测靶向猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的FnCas9-rgRNA敲除载体是否构建成功,试验先构建FnCas9-rgRNA敲除载体骨架并对其进行测序,然后将黄色荧光蛋白(EYFP)、PRRSV分别与各自的FnCas9-rgRNA敲除载体转染至HEK293、Marc145细胞内,通过流式细胞仪分析HEK293细胞内的荧光强弱及Marc145细胞的病变程度,并对FnCas9-rgRNA敲除载体的初步构建、载体活性进行研究。结果表明:FnCas9-rgRNA敲除载体骨架测序正确,流式细胞仪分析显示FnCas9-rgRNA敲除载体对HEK293细胞内EYFP基因的表达产生明显抑制作用,表达荧光的细胞数量明显下降,3种针对PRRSV设计的rgRNA分别与FnCas9表达载体共转染细胞,接种病毒后Marc145细胞病变程度明显降低。说明靶向PRRSV的FnCas9-rgRNA敲除载体构建方式正确且FnCas9-rgRNA敲除载体具有活性。
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