| 新城疫病毒F蛋白和禽致病性大肠杆菌OmpA嵌合蛋白的表达及双特异性抗体制备 |
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| 引用本文： | 袁橙,王永娟,郭梦娇,刘思琪,周雨豪.新城疫病毒F蛋白和禽致病性大肠杆菌OmpA嵌合蛋白的表达及双特异性抗体制备[J].黑龙江畜牧兽医,2024(1):103-108. |
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| 作者姓名： | 袁橙 王永娟 郭梦娇 刘思琪 周雨豪 |
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| 作者单位： | 1. 江苏农牧科技职业学院动物医学院;2. 扬州大学兽医学院 |
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| 基金项目： | 江苏省高等学校自然科学研究面上项目(21KJB230007)；;江苏高校“青蓝工程”项目(苏教师函[2020]10号)；;江苏省大学生创新创业训练计划项目(202112806006Y)； |
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| 摘 要： | 为获得Ⅶ型新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)融合蛋白(fusion protein, F蛋白)和O18型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)外膜基因A(outer-membrane proteases, OmpA)嵌合蛋白和双特异性抗体，试验首先采用基因合成技术获得Ⅶ型NDV F基因和O18型APEC的OmpA基因片段，使用同源重组技术将F基因插入到OmpA基因中，再将重组基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中构建嵌合表达质粒，对重组质粒中的插入基因序列进行测序鉴定；将序列正确的嵌合表达质粒转入大肠杆菌BL21(Rosetta)感受态细胞中，利用IPTG诱导嵌合蛋白表达，使用SDS-PAGE和Western-blot检验嵌合蛋白的表达情况；纯化嵌合蛋白后免疫兔获得抗血清，抗血清再经抗原亲和纯化层析柱纯化获得多克隆抗体，采用间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定抗体效价。结果表明：成功合成了Fo和OmpA1、OmpA...
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| 关 键 词： | 新城疫病毒F蛋白 大肠杆菌OmpA蛋白 嵌合蛋白 原核表达 多克隆抗体 |
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