| 大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基K63突变体表达载体的构建及其在真核细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 韩冬梅,李秀锦,李楠,王微,李巍,潘素敏,仲飞.大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基K63突变体表达载体的构建及其在真核细胞中的表达[J].黑龙江畜牧兽医,2009(4). |
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| 作者姓名： | 韩冬梅 李秀锦 李楠 王微 李巍 潘素敏 仲飞 |
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| 作者单位： | 韩冬梅,李楠,王微,李巍,潘素敏,仲飞(河北农业大学,动物科技学院基础兽医部,河北,保定,071001);李秀锦(燕山大学,环境与化学工程学院生物工程系,河北,秦皇岛,066004)
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| 基金项目： | 河北农业大学校长基金 |
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| 摘 要： | 采用PCR方法从产肠毒素大肠杆菌(ETEC)44815菌株基因组中扩增不耐热肠毒素A亚基(LTA)编码基因,并将大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因插入到含有人CD5信号肽序列的pcDNACD5sp真核表达载体中,构建成pcDNACD5sp/LTA分泌性真核表达载体,然后采用定点突变方法将大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基第63位的丝氨酸改变为赖氨酸,构建成pcDNACD5sp/LTAK63突变体,经磷酸钙介导将pcDNACD5sp/LTAK63质粒转染HEK293T细胞进行表达.结果表明:试验克隆的大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因与GenBank中大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因序列相比,碱基序列、氨基酸序列同源性均达99%;表达产物经Western-blot检测,结果说明构建的含有人CD5信号肽的LTAK63基因能够在真核细胞中进行分泌性表达.
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| 关 键 词： | 大肠杆菌 大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基 基因克隆 定点突变 CD5信号肽 真核表达 |
Construction of expression vector containing E.coli heat-labile enterotoxin A subunit K63 mutant gene and its expression in eukaryotic cells |
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