禽腺病毒血清4型感染鸡组织中NLRP3基因转录水平的实时荧光定量PCR分析

旨在分析禽腺病毒血清4型（FAdV-4）感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平，本研究设计鸡NLRP3特异性引物，利用RT-PCR扩增NLRP3基因180 bp片段并克隆至pMD-18T载体，制备重组质粒pMD-18T-NLRP3。以pMD-18T-NLRP3质粒作为标准品进行荧光定量PCR并建立标准曲线。通过反应条件优化，成功建立了检测NLRP3基因的实时荧光定量PCR方法，并利用该方法对致病性FAdV-4感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平进行了分析。结果显示，所设计的NLRP3引物可特异性扩增鸡NLRP3基因，建立的实时荧光定量PCR对鸡NLRP3标准质粒的扩增曲线良好，标准品的拷贝数与Cq值呈现良好的线性关系。与对照组相比，NLRP3分子在FAdV-4感染鸡肝和脾中的转录水平极显著高于对照组（P<0.001），在盲肠扁桃体和法氏囊的表达显著高于对照组（P<0.01）。本研究所建立的鸡NLRP3基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR可以检测FAdV-4感染鸡不同组织中NLRP3的转录水平；致病性FAdV-4感染所造成的组织炎症损伤与NLRP3分子密切相关。