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| 巢式PCR检测隐孢子虫卵囊的研究 | |
| 引用本文： | 张龙现,蒋金书,刘群,宁长申,朱引洁,吴绍强.巢式PCR检测隐孢子虫卵囊的研究[J].畜牧兽医学报,2003,34(5):509-514. |
| 作者姓名： | 张龙现 蒋金书 刘群 宁长申 朱引洁 吴绍强 |
| 作者单位： | 1. 河南农业大学,郑州,450002;中国农业大学动物医学院,北京,100094 2. 中国农业大学动物医学院,北京,100094 3. 河南农业大学,郑州,450002 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(30170695)，河南省杰出青年基金资助项目。 |
| 摘 要： | 隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊,从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作起始PCR(Primary PCR)模板,以起始PCR的产物为模板进行巢式PCR(Nested PCR),用2对人工合成寡核苷酸分别作为两个PCR的引物,扩增片段大小分别为1325bp和820bp。优化了Mg2+浓度、引物浓度和dNTP浓度,并进行了特异性检验。建立的巢式PCR具有隐孢子虫属特异性,不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段,而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段。样品经过初步纯化之后,起始PCR和巢式PCR最低检测值卵囊分别为2 86×103个/ml和≤2 86个/ml;从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA,尔后经过DNA纯化试剂盒纯化,其起始PCR和巢式PCR粪便中卵囊最低检测值分别为2 86×107个/g和≤2 86个/g。有望发展为试剂盒。 |
| 关 键 词： | 巢式PCR检测 隐孢子虫卵囊 人畜共患原虫病 临床样品 纯化 数量 奶牛粪便 |
| 文章编号： | 0366-6964(2003)05-0509-06 |
Study on Detection of Cryptosporidia Oocysts in Fecal Sample from Animal by Nested-PCR |
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| Abstract: | |
| Keywords: | Cryptosporidium Nested PCR |
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