| 实时荧光定量PCR检测H1N1亚型猪流感病毒 |
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| 引用本文： | 段廷云,陈红英,崔保安,魏战勇,李新生,王学斌.实时荧光定量PCR检测H1N1亚型猪流感病毒[J].畜牧兽医学报,2008,39(6). |
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| 作者姓名： | 段廷云 陈红英 崔保安 魏战勇 李新生 王学斌 |
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| 作者单位： | 1. 河南农业大学牧医工程学院,郑州,450002;漯河出入境检验检疫局,漯河,462001
2. 河南农业大学牧医工程学院,郑州,450002 |
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| 基金项目： | 河南省高校杰出科研创新人才工程项目 |
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| 摘 要： | 根据GenBank中H1N1亚型猪流感病毒NP基因的序列（DQ889686）,利用Premier express设计并合成1对引物和相应的TaqMan探针,从猪流感病毒HN407株接种的鸡胚尿囊液中提取总RNA,经RT-PCR扩增NP基因。将鉴定正确的NP基因片段克隆入pGEM-T Easy载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒。以该阳性重组质粒为荧光定量PCR标准品模板建立标准曲线。对探针浓度、引物浓度、镁离子浓度和退火温度进行优化,建立了最佳的荧光定量PCR反应体系和扩增程序。经临床应用表明荧光定量PCR的建立为早期诊断猪流感病毒、定量分析猪流感病毒感染程度奠定了基础。
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| 关 键 词： | 猪流感病毒 H1N1亚型 荧光定量PCR |
Development of Real-Time Fluorescent Quantitative PCR Assay to Detect H1N1 Subtype Swine Influenza Virus |
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| DUAN Ting-yun,CHEN Hong-ying,CUI Bao-an,WEI Zhan-yong,LI Xin-sheng,WANG Xue-bin.Development of Real-Time Fluorescent Quantitative PCR Assay to Detect H1N1 Subtype Swine Influenza Virus[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2008,39(6). |
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| Authors: | DUAN Ting-yun CHEN Hong-ying CUI Bao-an WEI Zhan-yong LI Xin-sheng WANG Xue-bin |
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