| 猪β-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其活性 |
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| 引用本文： | 姚清侠,曹毅,钱平,徐卓菲,何雁南,司有辉,陈焕春.猪β-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其活性[J].畜牧兽医学报,2007,38(5):506-512. |
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| 作者姓名： | 姚清侠 曹毅 钱平 徐卓菲 何雁南 司有辉 陈焕春 |
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| 作者单位： | 华中农业大学预防兽医学院动物病毒室,武汉,430070 |
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| 基金项目： | 国家863计划基金（2002AA245071）;湖北省科技攻关（2004AA202B01）资助项目 |
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| 摘 要： | 为了高效表达分泌型的猪β-干扰素,将去除信号肽的编码梅山猪β-干扰素成熟多肽基因(mPoIFNβ)插入酵母-大肠杆菌穿梭载体pPIC9K,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFNβ。将以SalⅠ线性化的pPIC9K-mPoIFNβ用化学方法(LiCl),与鲑鱼精DNA(ssDNA)共转化入毕赤酵母菌株GS115,转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后获得阳性菌株,再经高浓度G418筛选到多拷贝菌株。以1%甲醇连续诱导4 d,SDS-PAGE和Western blot检测结果表明:表达产物为22 ku和26 ku的混合物,在GS115中的表达量约为80 mg/L,占分泌型总蛋白的29.4%~30.8%,表明猪β-干扰素基因在毕赤酵母中获得了高效分泌表达。对表达产物进行理化分析发现,重组酵母菌表达的蛋白耐酸(pH2),对热(56℃)部分敏感,并能被特异性的抗猪β-干扰素抗体中和而不与抗猪γ-干扰素抗体反应。以细胞病变抑制法(CPE50)测定干扰素抗病毒活性,在MDBK(牛肾细胞系)中表达的猪β-干扰素的抗VSV比活性达到2.0×106U/mg;对口蹄疫病毒在IBRS-2细胞中的增殖也有明显的抑制作用。
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| 关 键 词： | 猪β-干扰素 毕赤酵母 分泌表达 抗病毒活性 口蹄疫病毒 |
| 文章编号： | 0366-6964（2007）05-0506-07 |
| 修稿时间： | 2006-07-27 |
Secreting Expression of Porcine Interferon-β in Pichia pastoris and Its Antiviral Activity |
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| YAO Qing-xia,CAO Yi,QIAN Ping,XU Zuo-fei,HE Yan-nan,SI You-hui,CHEN Huan-chun.Secreting Expression of Porcine Interferon-β in Pichia pastoris and Its Antiviral Activity[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2007,38(5):506-512. |
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| Authors: | YAO Qing-xia CAO Yi QIAN Ping XU Zuo-fei HE Yan-nan SI You-hui CHEN Huan-chun |
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| Institution: | Laboratory of Animal Virology, College of Veterinary Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, Medicine, China |
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