| 鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体库的构建 |
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| 引用本文： | 王乃东,薛立群,许道军,袁安文,邓治邦.鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体库的构建[J].畜牧兽医学报,2007,38(4):344-351. |
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| 作者姓名： | 王乃东 薛立群 许道军 袁安文 邓治邦 |
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| 作者单位： | 1. 湖南农业大学动物医学院,长沙,410128;湖南农业大学动物科技学院,长沙,410128
2. 湖南农业大学动物医学院,长沙,410128 |
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| 摘 要： | 利用雄鼠脾细胞免疫6~7周龄C57BL/6雌鼠,加强免疫后取脾细胞,TRIZOL法提取细胞总RNA,并逆转录合成cDNA第一条链。以其为模板,利用特异性Ig基因的引物PCR扩增出重链Fd片段和κ链基因,并将扩增出基因重组到噬质粒载体pComb3中,重组噬质粒转化大肠杆菌XL1-Blue中,分别构建κ链基因库和抗体Fab段基因库。分别经蓝白斑筛选,计算转化效率,通过PCR反应和双酶切反应鉴定抗体库的重组率,轻链、重链Fd段基因的重组率均为80%。抗体Fab段基因库经过辅助噬菌体VCSM13超感染,成功构建了鼠源性噬菌体Fab抗体库,并测定噬菌体抗体库的库容和滴度,结果分别为1.5×107,3.2×1011pfu/mL。对噬菌体抗体库的18个克隆进行ELISA分析,结果显示以雄鼠脾细胞作为抗原时,有9个克隆含有雄性特异性的噬菌体抗体,而以雄鼠睾丸细胞作为抗原时,有8个克隆与睾丸细胞呈现结合活性。噬菌体抗体库的构建为雄性特异性抗原的鼠源性噬菌体抗体Fab片段的筛选及其应用、雄性特异性抗原和抗体功能性分子基础的研究奠定了坚实基础。
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| 关 键 词： | 小鼠 H—Y抗原 噬菌体展示技术 抗体库 |
| 文章编号： | 0366-6964（2007）04-0344-08 |
| 修稿时间： | 2006-03-06 |
Construction of Phage Display Library of Fab Antibodies Repertoies of Mouse Male Specific Antigen |
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| WANG Nai-dong,XUE Li-qun,XU Dao-jun,YUAN An-wen,DENG Zhi-bang.Construction of Phage Display Library of Fab Antibodies Repertoies of Mouse Male Specific Antigen[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2007,38(4):344-351. |
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| Authors: | WANG Nai-dong XUE Li-qun XU Dao-jun YUAN An-wen DENG Zhi-bang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | mouse H-Y antigen phage display technology antibody library |
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