绵羊痒螨兔亚种MMP2基因的转录水平及其重组蛋白间接ELISA的建立

本研究旨在分析绵羊痒螨兔亚种MMP2基因（PocMMP2）的虫体转录水平，及建立针对重组PocMMP2（rPocMMP2）蛋白抗体的间接ELISA检测方法（iELISA）。通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）测定PocMMP2在不同发育阶段虫体、饱食与饥饿虫体的转录水平，采用原核表达系统获得rPocMMP2，经方阵滴定法优化反应条件，建立rPocMMP2-iELISA，并用该方法检测成都地区有痒螨病流行病史兔场的86份兔血清。结果显示：PocMMP2在雌虫、雄虫、若虫和幼虫阶段均有表达，且在饥饿虫体的转录水平显著高于饱食虫体（P<0.05）；rPocMMP2约72 ku，主要存在于包涵体中；rPocMMP2-iELISA临界值为0.223，敏感性和特异性分别为86.0%和83.3%，受试者工作曲线下面积（AUC）为0.876，批内与批间重复性变异系数均小于10.00%；该方法的临床检测呈现74.42%的血清阳性检出率（64/86），高于病原学检出率（10.47%，9/86）。PocMMP2可能参与了绵羊痒螨兔亚种发育和入侵宿主过程，且所建立的rPocMMP2-iELISA有良好的敏感性、特异性和较高的重复性，可用于兔痒螨病的血清抗体检测。