| 血清学检测的雄性特异性抗原Fab抗体的特异性鉴定 |
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| 引用本文： | 王乃东,袁安文,邓治邦,屠迪,许道军,夏南松,杨大为,薛立群.血清学检测的雄性特异性抗原Fab抗体的特异性鉴定[J].畜牧兽医学报,2011,42(8). |
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| 作者姓名： | 王乃东 袁安文 邓治邦 屠迪 许道军 夏南松 杨大为 薛立群 |
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| 作者单位： | 湖南农业大学动物医学院,长沙,410128 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30901090/C120209); 湖南省教育厅科学研究优秀青年项目(09B046);湖南省教育厅科学研究一般项目(07C355); 湖南省研究生创新基金项目资助(CX2009B154) |
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| 摘 要： | 旨在研究血清学检测的雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体的特异性。以从噬菌体Fab抗体库中筛选到具有较高雄性特异性结合活性的重组噬菌体克隆为基础,构建Fab抗体的可溶性表达噬质粒,并诱导和纯化该抗体片段,利用免疫荧光FITC/DAPI共染技术和ELISA分析其特异性。结果表明,该抗体在约49 ku处有条带出现。在Fab抗体和H-Y抗血清的细胞免疫荧光比较分析试验中发现,从雌、雄鼠脾细胞的阳性细胞数量和平均荧光强度的角度分析,Fab抗体的雄性特异性强于抗血清。石蜡切片免疫荧光定量分析显示,Fab抗体与雄鼠肝脏的结合活性明显高于对应雌鼠,差异极显著(t=20.73,P=0.002 3<0.01),而H-Y抗血清与雄鼠肝脏的结合活性略高于对应雌鼠,差异显著(t=7.11,P=0.019 2<0.05)。以C57BL/6雄鼠脾细胞、睾丸细胞作为抗原的ELISA分析显示,Fab抗体具有雄性特异性,但Fab抗体的OD值低于抗血清。结果提示,Fab抗体的雄性特异性高于H-Y抗血清,但其雄性特异性结合活性低于H-Y抗血清,Fab抗体在具备雄性特异性的同时,仍有少量雌性非特异性结合,Fab抗体的体外亲和力成熟可作为后续研究工作,以获...
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| 关 键 词： | 小鼠 H-Y抗原 噬菌体展示技术 抗体库 免疫荧光 |
Determining Specificity of Fab Antibody against Mouse Serologically Detected Male Antigen |
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| WANG Nai-dong,YUAN An-wen,DENG Zhi-bang,TU Di,XU Dao-jun,XIA Nan-song,YANG Da-wei,XUE Li-qun.Determining Specificity of Fab Antibody against Mouse Serologically Detected Male Antigen[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2011,42(8). |
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| Authors: | WANG Nai-dong YUAN An-wen DENG Zhi-bang TU Di XU Dao-jun XIA Nan-song YANG Da-wei XUE Li-qun |
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| Institution: | WANG Nai-dong,YUAN An-wen,DENG Zhi-bang,TU Di,XU Dao-jun,XIA Nan-song,YANG Da-wei,XUE Li-qun (College of Veterinary Medicine,Hunan Agricultural University,Changsha 410128,China) |
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| Abstract: | To study specificity of Fab antibody against mouse serologically detected male antigen,based on recombinant phage clone with male specific activity screened from phage Fab antibody library,expression plasmid of soluble Fab antibody was constructed,antibody fragment was induced and purified,the antibody specificity was determined by immunofluorescence staining with FITC/DAPI and ELISA.The results showed that an about 49 ku band appeared in the SDS-PAGE,comparison of cell immunofluorescence staining of Fab an... |
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| Keywords: | mouse H-Y antigen phage display technology antibody library immunofluorescence |
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