检测鸡TRIM25蛋白的免疫组化方法 |
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引用本文: | 禇颖,马文杰,胡卫国,陈茹,邱建华,郭慧君,李宏梅.检测鸡TRIM25蛋白的免疫组化方法[J].畜牧兽医学报,2018(4). |
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作者姓名: | 禇颖 马文杰 胡卫国 陈茹 邱建华 郭慧君 李宏梅 |
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作者单位: | 山东农业大学动物科技学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东省畜禽疫病防制工程技术研究中心 |
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摘 要: | 为建立检测鸡TRIM25蛋白表达的免疫组化方法,根据发表的鸡TRIM25基因序列,设计引物,从海兰褐鸡脾中扩增TRIM25基因,构建重组原核表达质粒,通过诱导表达获得重组TRIM25蛋白,经纯化后免疫接种兔和小鼠,获得高效价血清抗体,用该抗体建立免疫组化方法,对鸡肺、脾、肝组织中TRIM25蛋白进行检测。结果显示,克隆的鸡TRIM25抗原基因大小为1 012bp,构建的重组表达质粒能够在大肠杆菌中稳定表达,经纯化后的重组蛋白质能够诱导兔和小鼠产生效价为1∶106以上的血清抗体,该血清抗体免疫组化检测发现鸡肺、脾和肝组织中均有不同程度的TRIM25蛋白表达,在肺组织中主要存在肺泡周围的内皮细胞、淋巴细胞等的细胞质内;脾组织主要出现在脾淋巴细胞和血管内皮细胞等的细胞质中;肝组织中主要出现在肝小叶肝细胞、淋巴细胞以及血管内皮细胞细胞质中。该研究为深入研究鸡TRIM25蛋白的组织分布、动态表达和生物学活性提供物质基础和方法依据。
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