| 鸡源 Bursin-ScFv 噬菌体展示文库的构建及初步筛选 |
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| 引用本文： | 邬向东,曲悦,谌南辉,王萍,何后军.鸡源 Bursin-ScFv 噬菌体展示文库的构建及初步筛选[J].畜牧兽医学报,2008,39(4):488-493. |
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| 作者姓名： | 邬向东 曲悦 谌南辉 王萍 何后军 |
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| 作者单位： | 1. 江西农业大学动物科学技术学院,南昌,330045
2. 辽宁医学院,锦州,121001 |
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| 基金项目： | 江西省自然科学基金项目资助(0130023):国家自然科学基金项目资助(30560107) |
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| 摘 要： | 本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡,获得产生抗独特型抗体的脾细胞,从中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链.以cDNA第一链为模板,根据来航鸡 IgG 抗体重链(VH)、轻链(VL)可变区基因FR设计引物,进行PCR扩增.在体外扩增出该抗体的可变区VH和VL基因(大小分别约为370和320 bp).通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VL ScFv,将ScFv DNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组的鸡源抗三肽囊素独特型抗体全套单链噬菌体抗体库.并测得该库容量约为5×105,噬菌体中ScFv基因的插入率为80%,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为1011PFU/mL的初级噬菌体抗体库.用抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的淘筛,出现特异性富集.经ELISA、动物试验表明所筛选的5个阳性克隆可与抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)特异性结合,并能促进抗体的生产.
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| 关 键 词： | 三肽囊素 抗独特型抗体 可变区 重链 轻链 单链抗体 单克隆抗体 噬菌体抗体库 |
| 文章编号： | 0366-6964(2008)04-0488-06 |
| 修稿时间： | 2007年5月8日 |
Construction and Screening of ScFv Phage Display Library of the Bursin Anti-idiotype Antibody from Chicken Immunized with Anti-Bursin McAb |
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| WU Xiang-dong,QU Yue,CHEN Nan-hui,WANG Ping,HE Hou-jun.Construction and Screening of ScFv Phage Display Library of the Bursin Anti-idiotype Antibody from Chicken Immunized with Anti-Bursin McAb[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2008,39(4):488-493. |
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| Authors: | WU Xiang-dong QU Yue CHEN Nan-hui WANG Ping HE Hou-jun |
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