| 山羊Sox2基因克隆、原核表达和GST融合蛋白纯化 |
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| 引用本文： | 郑喜邦,杨照海,刘平,赵华,卢晟盛,卢克焕,毕方方.山羊Sox2基因克隆、原核表达和GST融合蛋白纯化[J].畜牧兽医学报,2009,40(10). |
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| 作者姓名： | 郑喜邦 杨照海 刘平 赵华 卢晟盛 卢克焕 毕方方 |
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| 作者单位： | 广西大学动物科学与技术学院,南宁,530005 |
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| 基金项目： | 广西自然科学基金项目，广西亚热带生物资源保护利用重点实验室开放基金项目，广西大学科学基金项目 |
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| 摘 要： | 本研究旨在克隆山羊Sox2基因,构建pGEX-Sox2原核表达重组质粒,从大肠杆菌中获得纯化的GST-Sox2融合蛋白.应用RT-PCR方法从6周龄胎山羊生殖嵴扩增Sox2基因编码全序列,将其克隆到pMD18-T载体,然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体.重组质粒pGEX-Sox2转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳及Western blotting检测GST-Sox2融合蛋白表达,用谷胱甘肽Sepharose 4B介质分离纯化该融合蛋白.结果表明,山羊Sox2基因编码序列全长为960 bp;在优化的表达条件(1 mmo|·L-1 IPTG,22℃诱导16h)下,重组质粒(pGEX-Sox2)在大肠杆菌得到了高效表达;谷胱甘肽Sepharose 4B颗粒纯化蛋白得到预期大小的融合蛋白(约60 ku).结论,本研究克隆了山羊Sox2基因,获得了纯化的GST-Sox2融合蛋白,为制备其多克隆抗体奠定了基础,为进一步研究山羊iPS细胞(Induced pluripotent stem cells)创造了条件.
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| 关 键 词： | Sox2基因 原核表达 蛋白纯化 山羊 |
Cloning of Capra hircus Sox2, and Its Expression in Escherichia coli and Purification of GST-Sox2 Fusion Protein |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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