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| 猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法的建立 | |
| 引用本文： | 王云龙,刘建营,韩洁,陈小科,李玉林.猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法的建立[J].动物医学进展,2009,30(5). |
| 作者姓名： | 王云龙 刘建营 韩洁 陈小科 李玉林 |
| 作者单位： | 1. 河南郑州职业技术学院,河南郑州,450121;河南省生物工程技术研究中心,河南郑州,450001 2. 广东省畜牧技术推广站,广东广州,510500 3. 河南省生物工程技术研究中心,河南郑州,450001 |
| 摘 要： | 通过RT-PCR方法克隆了猪瘟病毒(CSFV) 5′端非编码区(UTR)的一段靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板.同时根据GenBank中的靶序列设计了用于FQ-PCR的一对引物和一条TaqMan探针.通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了CSFV检测的荧光定量PCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为 109～100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×109、1.0×108、1.0×107拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为19.73、22.95和26.24;变异系数分别为0.61%、1.77%和1.18%,均小于5%,说明此方法具有良好的准确性和重现性.对阳性组织病料的检测表明,该方法的检测灵敏度高出常规PCR,与套式PCR具有相近的灵敏度. |
| 关 键 词： | 猪瘟病毒 荧光定量PCR TaqMan探针 |
Establishment of Fluorescent Quantitative PCR for Detecting CSFV |
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| WANG Yun-long,LIU Jian-ying,HAN Jie,CHEN Xiao-ke,LI Yu-lin.Establishment of Fluorescent Quantitative PCR for Detecting CSFV[J].Progress In Veterinary Medicine,2009,30(5). | |
| Authors: | WANG Yun-long LIU Jian-ying HAN Jie CHEN Xiao-ke LI Yu-lin |
| Institution: | 1.Zhengzhou Technical College;Zhengzhou;Henan;450121;China;2.Guangdong Animal Husbandry Technique Application Station;Guangzhou;Guangdong;510500;3.Henan Bioengineering Research Center;450001;China |
| Abstract: | |
| Keywords: | CSFV fluorescent quantitative PCR TaqMan probe |
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