| 鲁西黄牛α干扰素基因的原核表达及其抗血清的制备 |
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| 引用本文： | 张永红,王长法,李景鹏.鲁西黄牛α干扰素基因的原核表达及其抗血清的制备[J].动物医学进展,2009,30(5). |
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| 作者姓名： | 张永红 王长法 李景鹏 |
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| 作者单位： | 山东万杰医学院,山东淄博,255213 |
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| 摘 要： | 采用PCR方法从鲁西黄牛基因组DNA中克隆了α干扰素(BoIFN-α)基因,并插入到pET32a+中,构建成重组原核表达质粒pET32a+/BoIFN-α,进行测序和诱导表达.测序结果表明,鲁西黄牛IFN-α基因全长498 个核苷酸,含1个开放阅读框(ORF),编码166 个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的牛α干扰素C亚型氨基酸组成同源性为97.6%.表达产物经SDS-PAGE分析,表达出40 ku的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的26.7%.表达产物经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化,纯化产物进行复性后免疫昆明系小鼠2次,制备高滴度的牛IFN-α抗血清.结果从鲁西黄牛中克隆了IFN-α基因的一种新亚型,即BoIFN-α C2,实现了高效表达和纯化,并制备了鼠抗牛IFN-α,为重组牛干扰素的开发奠定了基础.
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| 关 键 词： | 黄牛 α干扰素基因 表达 抗血清 |
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