| 摘 要： | 扎伊尔型埃博拉病毒(EBOV)的感染会引起人类以严重出血和发热为主要症状的传染病,死亡率高达90%,对公共卫生构成严重威胁。EBOV囊膜蛋白(GP)是病毒主要的免疫原性蛋白。本团队前期的研究表明,以新城疫病毒(NDV)为载体构建表达EBOV GP蛋白的重组病毒rLa-EBOVGP改变了 NDV的侵入方式。为了研制出安全性更高的埃博拉候选疫苗株,本研究将EBOV GP蛋白的融合域I~(532)突变为R后插入NDV LaSota疫苗株(rLa)基因组中,通过反向遗传学操作拯救表达EBOV GP(I~(532)R)蛋白的重组NDV,并将经PCR鉴定正确的重组病毒在鸡胚中连续传代检测了其的体外遗传稳定性。RT-PCR鉴定结果显示,EBOV突变的GP(I~(532)R)蛋白基因正确插入了 NDV基因组中,表明获得了重组病毒rLa-EBOVGP (I~(532)R);在鸡胚中连续传20代后,经RT-PCR扩增EBOV GP(I~(532)R)基因后经测序鉴定,结果显示rLa-EBOVGP(I~(532)R)能够保持良好的遗传稳定性。利用蔗糖梯度超速离心法纯化rLa、rLa-EBOVGP和rLa-EBOVGP(I~(532)R)病毒,分别进行western blot检测。结果显示,EBOV GP和GP (I~(532)R)蛋白均能够正确表达;将rLa、rLa-EBOVGP和rLa-EBOVGP (I~(532)R)分别感染BHK-21细胞后,利用激光共聚焦试验分析EBOV GP(I~(532)R)的表达和定位,结果显示GP(I~(532)R)能够表达且位于BHK-21细胞的细胞膜上;对纯化病毒利用免疫电镜观察病毒颗粒,结果可见rLa-EBOVGP (I~(532)R)与亲本病毒rLa结构特征相似,且GP (I~(532)R)蛋白能够嵌合在重组病毒粒子表面;生长动力学试验结果表明,rLa-EBOVGP(I~(532)R)与亲本株rLa在鸡胚中的生长特性基本一致,且能够稳定增殖;分别将重组病毒rLa-EBOVGP和rLa-EBOVGP(I~(532)R)经肌肉注射和滴鼻两种途径免疫小鼠,经稀释血清固定病毒的方法分别检测各组小鼠针对NDV和EBOV GP蛋白的中和抗体。结果显示rLa-EBOVGP (I~(532)R)能够诱导小鼠产生较高的针对NDV和EBOV GP蛋白的中和抗体。以上结果表明rLa-EBOVGP(I~(532)R)具有作为防控EBOV感染的储备性候选疫苗株的潜力。本研究为进一步研究GP(I~(532)R)的生物学功能奠定了基础。
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