| 东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库的构建 |
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| 引用本文： | 贾人初,孙毅,刘金明,傅志强,苑纯秀,石耀军,陆珂,孙焕,李浩,林矫矫.东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库的构建[J].中国预防兽医学报,2008,30(1):5-9. |
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| 作者姓名： | 贾人初 孙毅 刘金明 傅志强 苑纯秀 石耀军 陆珂 孙焕 李浩 林矫矫 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院上海兽医研究所,国家防治动物血吸虫病专业实验室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室,上海,200232;上海师范大学,生命与环境科学学院,上海,200234
2. 中国农业科学院上海兽医研究所,国家防治动物血吸虫病专业实验室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室,上海,200232 |
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| 基金项目： | 基金项目：上海市科学技术委员会科研计划项目（054909002）,科技部自然资源平台项目（2005DKA21104） |
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| 摘 要： | 本项研究的目的是构建东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫病抗性相关基因奠定基础.用TRIzol试剂提取东方田鼠肝脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA.在双链cDNA末端加上EcoRⅠ/HindⅢ定向接头并用EcoRⅠ和Hind Ⅲ酶切,使其两端分别带EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端.用Mini Column纯化、收集300 bp以上的双链cDNA片段,再连接于带有EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7 Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示cDNA文库.经测定,库容量为1.3×107 PFU/mL,扩增后文库滴度为1.8×1011 PFU/mL.对从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为91.7%,阳性克隆片段大小分布在200 bp～1 000 bp,其中有95.5%的插入片段大于300 bp.用日本血吸虫童虫可溶性抗原对文库进行了初筛,得到了21个ESTs,将这些阳性噬菌体克隆和血吸虫童虫共培养,其中大部分克隆诱导的童虫死亡率比阴性噬菌体对照高出2%～13%.
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| 关 键 词： | 东方田鼠 肝脏 T7噬菌体展示cDNA文库 东方田鼠 肝脏 噬菌体展示 文库 Microtus fortis liver cDNA library phage display 阴性 死亡率 血吸虫童虫 噬菌体克隆 共培养 阳性克隆 初筛 可溶性抗原 日本 插入片段 分布 大小 |
| 文章编号： | 1008-0589（2008）01-0005-05 |
| 收稿时间： | 2007-03-21 |
| 修稿时间： | 2007年3月21日 |
Construction of a T7 phage display cDNA library from liver of Microtus fortis |
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| JIA Ren-chu,SUN Yi,LIU Jin-ming,FU Zhi-qiang,YUAN Chun-xiu,SHI Yao-jun,LUKe,SUN Huan,LI Hao,LIN Jiao-jiao.Construction of a T7 phage display cDNA library from liver of Microtus fortis[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2008,30(1):5-9. |
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| Authors: | JIA Ren-chu SUN Yi LIU Jin-ming FU Zhi-qiang YUAN Chun-xiu SHI Yao-jun LUKe SUN Huan LI Hao LIN Jiao-jiao |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Microtus fortis liver T7 phage display cDNA library |
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