重组扬州鹅IFN-α的表达与活性研究 |
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引用本文: | 朱孟玲,王岑,曹霞,徐孝宙,刘海侠,王会聪,王永娟.重组扬州鹅IFN-α的表达与活性研究[J].中国预防兽医学报,2020(1):65-69. |
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作者姓名: | 朱孟玲 王岑 曹霞 徐孝宙 刘海侠 王会聪 王永娟 |
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作者单位: | 江苏农林职业技术学院;南京农业大学;南京中医药大学翰林学院;江苏农牧科技职业学院 |
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基金项目: | 江苏省产业体系建设项目;江苏高校“青蓝工程”资助项目;江苏省“333工程”第三层次培养对象项目;企事业单位横向合作课题(NSFPT201709、NSFPT201710)。 |
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摘 要: | 为获得具有抗病毒活性的鹅干扰素,本实验参考GenBank中鹅IFN-α基因序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增扬州鹅IFN-α的全基因。将去除信号肽的IFN-α克隆至pET32a(+)以构建pET-mGoIFN-α,重组菌经IPTG诱导表达重组蛋白,纯化后的蛋白(mGoIFN-α)免疫BALB/c小鼠,利用ELISA方法测定小鼠血清抗体效价,westernblot检测抗体特异性。同时,将IFN-α全长基因克隆至pcDNA3.1(-)以构建pcDNA-GoIFN-α,间接免疫荧光试验检测rGoIFN-α在鹅胚成纤维细胞(GEF)中的表达,细胞病变抑制法检测其抗水泡性口炎病毒(VSV)活性。结果显示:本研究扩增得到576bp的扬州鹅IFN-α全基因与486bp的成熟基因片段;原核表达的mGoIFN-α为36.3ku,免疫小鼠后可产生具有良好特异性与抗原活性的多克隆抗体,效价为1:16000;pcDNA-GoIFN-α可在GEF中表达,并具有较高的抗VSV活性。本研究为制备安全、高效的重组鹅干扰素,为研制鹅病毒性疾病的新型生物制剂奠定了基础。
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关 键 词: | 扬州鹅 IFN-Α 原核表达 真核表达 抗病毒活性 |
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