| 流感病毒聚合酶PB1-1蛋白的表达与单克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 葛叶,邓国华,李雪平,陈化兰.流感病毒聚合酶PB1-1蛋白的表达与单克隆抗体的制备[J].中国预防兽医学报,2009,31(9). |
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| 作者姓名： | 葛叶 邓国华 李雪平 陈化兰 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001 |
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| 摘 要： | 为制备抗流感病毒(AIV)聚合酶PB1-1蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究采用RT-PCR技术扩增H5N1亚型AIV聚合酶PB1部分基因片段,并将其克隆至载体pET-32a,转化至BL21细菌进行重组蛋白表达.靶蛋白经Ni+柱纯化后,western blot分析证实该重组蛋白与AIV阳性血清具有良好的免疫反应性.用纯化的PB1-1蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆,连续多次克隆纯化后获得2株能稳定分泌抗H5亚型PB1 MAb的细胞株CGFF10和FGFCE5,2株杂交瘤细胞的细胞培养上清及腹水效价分别为103、103和106、107.2株MAb的亚类均为IgG1.实验证明:所制备的MAb能与H5N1亚型PB1-1抗原发生特异反应,具有免疫活性,从而为PB1结构及功能的深入研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | PB1基因 原核表达 单克隆抗体 |
Expression of PB1-1 gene of influenza virus and preparation of a monoclonal antibody against PB1-1 protein |
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| GE Ye,DENG Guo-hua,LI Xue-ping,CHEN Hua-lan.Expression of PB1-1 gene of influenza virus and preparation of a monoclonal antibody against PB1-1 protein[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2009,31(9). |
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| Authors: | GE Ye DENG Guo-hua LI Xue-ping CHEN Hua-lan |
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