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| 大肠杆菌不耐热肠毒素突变体的原核表达及其活性研究 | |
| 引用本文： | 唐思静,刘惠莉,马勋,赵艳敏.大肠杆菌不耐热肠毒素突变体的原核表达及其活性研究[J].中国预防兽医学报,2012,34(9):697-701. |
| 作者姓名： | 唐思静 刘惠莉 马勋 赵艳敏 |
| 作者单位： | 1. 上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海201106;新疆巴音郭楞职业技术学院,新疆库尔勒841000 2. 上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海,201106 3. 石河子大学动物科技学院,新疆石河子,832003 |
| 基金项目： | 上海市科技兴农重点攻关项目 |
| 摘 要： | 为使大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,本实验通过PCR和重叠-延伸PCR扩增,制备了突变体LTR72/G192的基因片段,经酶切和测序结果表明构建的表达载体pLTR72/G192阅读框架正确,而且相应位点氨基酸获得了替换。IPTG诱导表达目的蛋白经SDS-PAGE电泳检测,表达出突变体重组蛋白为约30 ku和10 ku的两个蛋白带,与LTA、LTB亚基分子量相吻合。Western blot检测结果表明两个蛋白亚基均可与His抗体发生特异性反应。目的蛋白经纯化后进行ADP-核酸转移酶试验及Patent-mouse毒性试验检测其酶活性与毒性,突变重组蛋白与野生型LT相比其酶活性和毒性均明显降低。纯化的目的蛋白与鸡新城疫病毒弱毒疫苗联合一起经滴鼻免疫鸡,ELISA结果显示,突变体LTR72/G192能辅助新城疫疫苗在血清和黏膜中产生较高滴度的抗新城疫病毒的IgG和IgA。 |
| 关 键 词： | 大肠杆菌不耐热肠毒素 免疫原性 ADP-核酸转移酶 |
Expression and bio-activity of Escherichia coli heat-labile enterotoxin mutant proteins |
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| TANG Si-jing , LIU Hui-li , MA Xun , ZHAO Yan-min.Expression and bio-activity of Escherichia coli heat-labile enterotoxin mutant proteins[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2012,34(9):697-701. | |
| Authors: | TANG Si-jing LIU Hui-li MA Xun ZHAO Yan-min |
| Institution: | 1(1.Institute of Animal Science and Veterinary Medicine,Shanghai Academy of Agricultural Science,Shanghai 201106,China;2.Xinjiang Bayin Guoleng Technology College,Kuerle 841000,China;3.College of Life Animal Science,Shihezi University,Shihezi 832003,China) |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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