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绵羊痘病毒和山羊痘病毒双重PCR检测方法的建立及应用
引用本文:肖雯,聂福平,王昱,肖进文,周雪梅,丁森,周庆,李应国,刘力.绵羊痘病毒和山羊痘病毒双重PCR检测方法的建立及应用[J].中国预防兽医学报,2012,34(7):551-554.
作者姓名:肖雯  聂福平  王昱  肖进文  周雪梅  丁森  周庆  李应国  刘力
作者单位:1. 西南大学动物科技学院,重庆400715;重庆出入境检验检疫局,重庆400020
2. 重庆出入境检验检疫局,重庆400020;重庆市进出口食品安全工程中心,重庆400020
3. 重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆400054;重庆出入境检验检疫局,重庆400020
4. 西南大学动物科技学院,重庆,400715
摘    要:为建立鉴别绵羊痘病毒(SPPV)和山羊痘病毒(GTPV)的检测方法,本研究针对这2种病毒的基因组序列,分别设计2对特异性引物,通过对引物浓度、退火温度等的优化,建立了快速鉴别检测SPPV和GTPV的双重PCR方法。该方法分别扩增出SPPV长度为177 bp和GTPV长度为222 bp的目的片段。特异性试验结果显示,该方法对牛疙瘩皮肤病病毒、犬细小病毒、大肠杆菌O157、沙门氏菌、健康羊组织和牛组织均无扩增。敏感性试验显示,该方法最低可检测1.725×107copies/μL的SPPV和1.71×106copies/μL的GTPV。应用该方法对50份临床病料样品进行检测的结果与病毒分离鉴定结果一致,均检出5份感染GTPV的病料和2份感染SPPV的病料,表明该方法可以用于临床病料样品的检测。

关 键 词:绵羊痘病毒  山羊痘病毒  双重PCR

Differentiation of sheeppox virus and goatpox virus by duplex PCR
XIAO Wen , NIE Fu-ping , WANG Yu , XIAO Jin-wen , ZHOU Xue-mei , DING Sen , ZHOU Qing , LI Ying-guo , LIU li.Differentiation of sheeppox virus and goatpox virus by duplex PCR[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2012,34(7):551-554.
Authors:XIAO Wen  NIE Fu-ping  WANG Yu  XIAO Jin-wen  ZHOU Xue-mei  DING Sen  ZHOU Qing  LI Ying-guo  LIU li
Institution:1*(1.College of Animal Science and Technology,Southwest China University,Chongqing 400715,China; 2.Chongqing Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of China,Chongqing 400020,China;3.Chongqing Import and Export Food Safety Engineering Center,Chongqing 400020,China;4.Chongqing University of Technology,Chongqing 400054,China)
Abstract:To established differential detection method for sheeppox virus(SPPV) and goatpox virus(GTPV),a duplex PCR was developed with two pairs of specific primers designed according to SPPV and GTPV sequences.Under optimized reaction conditions,two specific fragments of 177 bp(SPPV) and 222 bp(GTPV) were amplified by the duplex PCR with a detection limit of 1.725×107 copies for SPPV and 1.71×106 copies for GTPV.The specific tests indicated that no product was amplified from lumpy skin disease virus,canine parvovirus,E.coli O157,Salmonella.Tested on 50 clinical samples,of which 5 positive for GTPV and 2 positive for SPPV by either the duplex PCR or virus isolation.
Keywords:sheeppox virus  goatpox virus  duplex PCR
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