| 一种检测蛋白酶活性的荧光素酶报告基因系统的构建及应用 |
| |
| 引用本文： | 周仕君,宋洁,李帅,刘佳,李江南,翁长江.一种检测蛋白酶活性的荧光素酶报告基因系统的构建及应用[J].中国预防兽医学报,2023(5):535-539. |
| |
| 作者姓名： | 周仕君 宋洁 李帅 刘佳 李江南 翁长江 |
| |
| 作者单位： | 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队;2. 黑龙江省免疫学重点实验室 |
| |
| 基金项目： | 黑龙江省自然科学基金优秀青年项目(YQ2019C033)；;国家自然科学基金面上项目(31872448)； |
| |
| 摘 要： | 为建立一种检测蛋白酶活性的方法，本研究将IL-1β前体基因和荧光素酶基因融合，克隆至p CAGGS真核载体，构建了基于荧光素酶的报告基因系统(iGLuc)，同时构建GLuc真核表达质粒作为对照。以PRRSV nsp4和ASFV S273R蛋白酶为检测对象，利用该报告基因系统对病毒蛋白酶活性进行检测，将iGLuc中蛋白酶酶切位点(FVCDAN)相对应的基因序列替换为Kpn I酶切位点，构建重组质粒Kpn I-iGLuc，然后分别将PRRSV nsp4和ASFV S273R蛋白酶切割位点对应的核酸序列插入至报告基因Kpn I-iGLuc中的Kpn I位点，构建重组质粒nsp4-iGLuc和S273R-i GLuc。分别将报告基因质粒(iGLuc、GLuc、Kpn I-i GLuc、nsp4-i GLuc和S273R-iGLuc)与不同剂量的相应蛋白酶真核表达质粒共转染HEK293T细胞，24 h后检测上清中荧光素酶GLuc的活性。结果显示，转染i GLuc、nsp4-iGLuc或S273R-iGLuc质粒的上清中荧光信号随着相应蛋白酶的剂量增加而升高，呈现剂量依赖性，而缺失蛋白酶切位点的对...
|
| 关 键 词： | 蛋白酶活性 荧光素酶报告基因 病毒蛋白酶 检测方法 |
|
