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牛肠道病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立
引用本文:吴丹,吴涛,张鹤晓,高志强,蒲静,张伟,乔彩霞,谷强,夏春.牛肠道病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J].中国预防兽医学报,2012,34(11).
作者姓名:吴丹  吴涛  张鹤晓  高志强  蒲静  张伟  乔彩霞  谷强  夏春
作者单位:1. 中国农业大学动物医学院,北京100193;北京出入境检验检疫局,北京100026
2. 中国兽医药品监察所,北京,100081
3. 北京出入境检验检疫局,北京,100026
4. 中国农业大学动物医学院,北京,100193
基金项目:国家质检总局科研项目"牛肠道病毒快速检测技术研究"
摘    要:为建立快速、准确地检测牛肠道病毒(BEV)及对北京周边地区牛群中BEV感染情况进行检测,本研究通过设计合成扩增BEV 5'UTR序列的引物及探针建立了检测BEV的通用型TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测方法并对反应条件进行了优化.该方法对BEV的最小检测量为0.1 TCID50/0.1mL,敏感性比病毒分离法高10倍.而且该方法对其他牛相关病毒均无交叉反应.用3批试剂对3个稀释度的BEV培养物进行批内和批间重复性试验,其变异系数均小于1.1%,表明该方法具有良好的重复性.采用该方法对北京周边地区牛群采集的852份临床样品进行检测,并与病毒分离方法比较,两种方法检测结果完全一致.因此,本研究所建立的BEVTaqMan RT-PCR检测方法具有快速、准确、特异性强、敏感性高、重复性好的优点,为国内BEV的检测提供了有力的技术支持.本研究首次通过病毒核酸检测证明了我国部分地区的牛群中存在BEV感染.

关 键 词:牛肠道病毒  TaqMan  RT-PCR  病毒核酸检测

Establishment of real-time RT-PCR method for detection of bovine enterovirus
WU Dan,WU Tao,ZHANG He-xiao,GAO Zhi-qiang,PU Jing,ZHANG Wei,QIAO Cai-xia,GU Qiang,XIA Chun.Establishment of real-time RT-PCR method for detection of bovine enterovirus[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2012,34(11).
Authors:WU Dan  WU Tao  ZHANG He-xiao  GAO Zhi-qiang  PU Jing  ZHANG Wei  QIAO Cai-xia  GU Qiang  XIA Chun
Abstract:
Keywords:
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