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应用液态悬浮芯片技术建立17种大肠杆菌耐药基因多重快速检测方法
引用本文:韩天飞,赵建梅,刘娜,张青青,王娟,张喜悦,刘俊辉,李月华,黄秀梅,王君玮,曲志娜,祁克宗.应用液态悬浮芯片技术建立17种大肠杆菌耐药基因多重快速检测方法[J].中国动物检疫,2021,38(10):120-126.
作者姓名:韩天飞  赵建梅  刘娜  张青青  王娟  张喜悦  刘俊辉  李月华  黄秀梅  王君玮  曲志娜  祁克宗
基金项目:青岛市科技惠民示范引导专项(21-1-4-ny-11-nsh);国家重点研究开发项目(2018YFD0500505)
摘    要:为建立一种快速、高通量的多重耐药基因检测方法,利用Luminex液态芯片平台,建立了可同时检测17种耐药基因的液态芯片检测方法。该方法对大肠杆菌常见的七大类抗菌药物所对应的17种耐药基因(blaSHV、blaCMY-1、Aph3-IIa-1、aac(6)-Ib-cr、aadA-1、cmlA-1、gyrA、mcr-1、NDM-1、parC、qnrS-1、sul-1、sul-2、sul-3、tetA、tetB、tetX)进行序列分析,随后依次对其设计多重PCR特异性引物,构建特异的阳性质粒作为阳性参比品进行液态芯片检测条件优化,从而进行多重耐药基因液态芯片检测方法的研发。结果显示:成功构建了17种耐药基因的阳性质粒,并建立了两套体系用于检测17种耐药基因。在特异性试验中,两套体系中的检测信号无干扰,具有较高的特异性数值;敏感性试验中,体系一的单一质粒最低检测量为102~104 copies/μL,混合质粒为103~105 copies/μL;体系二的单一质粒最低检测量为102~105 copies/μL,混合质粒为104~106 copies/μL;有效性试验中,液态芯片法与PCR检测结果的Kappa值多在0.60以上,具有高度一致性。结果表明,本研究建立的2套液态芯片检测体系具有高通量、高灵敏和高特异性的优点,可同时对17种耐药基因进行检测,能够达到快速检测的目的。

关 键 词:液态芯片  耐药基因  多重耐药  快速检测

A Multiplex Rapid Assay for Detection of 17 Drug Resistance Genes of E. coli Established by Liquid Suspension Microarray
Han Tianfei,Zhao Jianmei,Liu N,Zhang Qingqing,Wang Juan,Zhang Xiyue,Liu Junhui,Li Yuehu,Huang Xiumei,Wang Junwei,Qu Zhin,Qi Kezong.A Multiplex Rapid Assay for Detection of 17 Drug Resistance Genes of E. coli Established by Liquid Suspension Microarray[J].China Journal Of Animal Quarantine,2021,38(10):120-126.
Authors:Han Tianfei  Zhao Jianmei  Liu N  Zhang Qingqing  Wang Juan  Zhang Xiyue  Liu Junhui  Li Yuehu  Huang Xiumei  Wang Junwei  Qu Zhin  Qi Kezong
Abstract:
Keywords:
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