金鱼造血器官坏死病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 |
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引用本文: | 张旻,王姝,王娜,景宏丽,徐立蒲,吴绍.金鱼造血器官坏死病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立[J].中国动物检疫,2017,34(11):99-103. |
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作者姓名: | 张旻 王姝 王娜 景宏丽 徐立蒲 吴绍 |
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基金项目: | 国家科技支撑计划(2013BAD12B02);北京市观赏鱼产业创新团队(BAIC03-2017) |
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摘 要: | 金鱼造血器官坏死病毒(Goldfish haematopoietic necrosis virus,GFHNV)是一种可感染金鱼等鲤科鱼类,并可导致其死亡的疱疹病毒。为了快速检测病原,本研究根据GFHNV的主要衣壳蛋白(Major captor protein,MCP)序列中的一段保守基因序列,设计引物和Taq Man探针,建立了GFHNV特异性的实时荧光定量PCR检测方法 ;并利用PCR反应扩增出的MCP基因,制备了p UC-GFHNV重组质粒作为阳性对照。经试验,该方法检测限最低可达10个拷贝数的目的基因,而且与锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)、甲鱼虹彩病毒(Softshell turtle iridovirus,STIV)、流行性造血器官坏死病毒(Epizootic haematopoietic necrosis,EHNV)、斑点叉尾鮰病毒(Channel catfish virus,CCV)以及白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,WSSV)等5种水生动物病毒无交叉反应。该方法具有简便、快速、敏感、特异等优点,为该病的诊断与病原检测提供了一个重要手段。
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关 键 词: | 鱼类病毒病 金鱼造血器官坏死病毒 主要衣壳蛋白 实时荧光定量PCR TaqMan探针 |
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