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| 牛Mx1基因重组慢病毒载体的构建及沉默Mx1细胞的获得 | |
| 作者单位： | ;1.吉林农业大学动物科技学院;2.山东省农业科学院奶牛研究中心;3.军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室 |
| 摘 要： | 采用RT-PCR技术从牛肾细胞中扩增出Mx1基因,构建牛Mx1基因过表达重组载体;针对牛Mx1mRNA序列设计shRNA引物对,构建针对牛Mx1的RNAi载体。将牛Mx1的过表达载体和RNAi载体共转染293T细胞,利用Western blot方法检测牛Mx1蛋白的表达情况,筛选有效沉默牛Mx1的shRNA;将有效沉默Mx1的RNAi载体转染牛胎儿气管原代上皮细胞,经流式细胞分选,Western blot检测,获得沉默牛Mx1的稳定细胞系。结果表明,成功构建了牛Mx1过表达重组载体pcDNA3.1-Mx1和RNAi载体RNAi-Mx1A、RNAi-Mx1B、RNAi-Mx1C,筛选到RNAi-Mx1A沉默牛Mx1效果最好;经流式细胞分选和Western blot检测,获得有效沉默牛Mx1的牛胎儿气管原代上皮细胞,为进一步探讨牛Mx1抗病毒作用及机制的研究奠定试验基础。 |
| 关 键 词： | 牛Mx1基因 胎儿原代气管上皮细胞 RNA干扰 |
Construction of bovine Mx1 recombinant lentivirus vector and establishment of silencing bovine Mx1 cells |
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