大肠杆菌O157:H7 Z3955蛋白的亚细胞定位分析

α-淀粉酶是一种广泛存在的淀粉分解酶，催化淀粉和相关α-葡聚糖中α-1,4-葡萄糖苷键的水解，它可以定位在不同细菌的不同位置。大肠杆菌O157:H7 Z3955基因的同源基因在非致病性大肠杆菌编码α-淀粉酶，可以确定Z33955蛋白的准确定位。PCR扩增大肠杆菌O157:H7 EDL933菌株的Z3955基因，扩增的基因片段连接pGEX-6P-1载体构建重组质粒，将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中，表达重组蛋白GST-Z3955,并用谷胱甘肽琼脂糖珠纯化。纯化的GST-Z3955免疫BALB/c小鼠产生抗血清。利用GST-Z3955蛋白的抗血清检测Z3955在细菌中的亚细胞定位。最终成功构建了能表达目的蛋白的大肠杆菌BL21(DE3)-pGEX-6P-1-Z3955重组菌。用纯化的重组GST-Z3955蛋白免疫小鼠，获得了Z3955多克隆抗体。免疫印迹确定Z3955抗血清的最佳工作浓度为1∶12 500。Z3955定位在大肠杆菌O157:H7的胞质、内膜、细胞周质和外膜，但不能分泌到细胞外。Z3955蛋白的亚细胞定位鉴定将有助于该蛋白的功能研究，并有助于了解Z3955在大肠杆菌...