| T7 RNA多聚酶基因的克隆、序列测定及其在E.coli中的表达 |
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| 引用本文： | 余兴龙,涂长春,徐兴然,张茂林,张青婵,李作生.T7 RNA多聚酶基因的克隆、序列测定及其在E.coli中的表达[J].中国兽医学报,2003,23(5):452-454. |
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| 作者姓名： | 余兴龙 涂长春 徐兴然 张茂林 张青婵 李作生 |
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| 作者单位： | 解放军军需大学,军事兽医研究所,吉林,长春,130062 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 (3 9970 5 5 7) |
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| 摘 要： | 从BL21(DE3)E．coli菌株中以PCR的方法扩增得到了与T7RNA多聚酶(T7RNApolymerase，T7pol)基因大小一致的DNA片断。将PCR产物纯化后直接克隆到pGEM—T载体中，经酶切鉴定和DNA序列分析表明克隆得到了正确的T7pol基因。将T7pol基因亚克隆入pET-28b( )中，构建得到原核表达质粒pET28T7。该质粒的BL21(DE3)pLysS转化菌在IPTG的诱导下可表达约98800的蛋白，这与T7pol的相对分子质量一致。将该质粒转化DH5α、JMl09、HBl01、BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS等5种不同的宿主菌，仅有转化T7pol酶活性受到抑制的宿主菌BL21(DE3)pLysS才能得到转化子，而其余4种T7T7pol酶活性不受抑制的E．coli宿主菌不能得到转化子。pET28T7原核表达质粒这种仅能在T7pol酶活性受到抑制的宿主菌中才能存活的现象说明本试验所克隆的T7pol基因能正确表达出具有RNA转录酶活性的蛋白。
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| 关 键 词： | T7RNA多聚酶基因 基因克隆 序列测定 基因表达 E．coli PCR RNA转录酶 RNA病毒 |
| 文章编号： | 1005-4545(2003)05-0452-03 |
| 修稿时间： | 2002年9月6日 |
Cloning and Sequencing of T7 RNA Polymerase and Its Expression in E.coli |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | T7 RNA polymerase cloning sequencing expression |
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