樱桃谷鸭CD3ε胞外区多肽原核表达、抗体制备及初步应用

应用PCR技术从樱桃谷鸭总RNA中克隆CD3ε基因ORF序列(DuCD3ε),通过生物学软件分析,切除信号肤和跨膜区,将胞外区cDNA(DuCD3ε)插入表达栽体pET-28a.构建了E.coli BL21(pET一28a/DuCD3ε)原核表达系.经IPTG诱导表达、蛋白纯化,制备兔抗DuCD3ε多克隆抗体.应用免疫组织化学SABC方法在樱桃谷鸭外周血液涂片上进行初步应用.结果显示,DuCD3ε胞外区序列长252 bp,编码83个氨基酸.SDS-PAGE和Western-blot分析证实重组DuCD3ε(rDuCD3ε)在BL21大肠杆菌中表达.表达蛋白相对分子质量约为14000,经3次免疫后,通过问接ELISA测定兔抗rDuCD3ε蛋白多克隆抗体效价为1:12800.在鸭瘟病毒感染后不同时间,对照组CD3+T淋巴细胞数占淋巴细胞总数的百分比为28%～47%,试验组CD3+T淋巴细胞百分比为32%～77%,在感染后1～3 d外周血液中CD3+T淋巴细胞比值急剧升高,3 d以后比值缓慢下降.结果表明,本试验成功表达CD3ε胞外区多肽,制备的兔抗樱桃谷鸭CD3ε多克隆抗体可用于鸭外周血中CD3+T淋巴细胞标记染色,具有较好的特异性.