| 犬瘟热病毒核蛋白基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 袁宝,王琛,任文陟,张嘉保,赵志辉.犬瘟热病毒核蛋白基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立[J].中国兽医学报,2008,28(7). |
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| 作者姓名： | 袁宝 王琛 任文陟 张嘉保 赵志辉 |
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| 作者单位： | 吉林大学畜牧兽医学院,吉林,长春,130062 |
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| 基金项目： | 吉林省科技计划发展资助项目 |
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| 摘 要： | 应用RT-PCR技术特异扩增出犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)核衣壳蛋白基因(Nucleocapsid pro-tein,N)高度保守序列,克隆至质粒pMD18-T中获得重组质粒pMD18-T-N,测序结果证实了重组质粒的可靠性。将目的片段克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,重组质粒转化大肠杆菌BL21株,经1 mmol/L IPTG诱导,N基因融合蛋白获得高效表达。SDS-PAGE电泳分析表明,表达产物的相对分子质量与预期的55 000相符。Western-blot检测表明,表达产物与CDV标准阳性血清呈阳性反应。在此基础上,初步建立了以纯化的N蛋白为包被抗原的间接ELISA检测方法。结果表明,大肠杆菌中表达的CDV N蛋白在免疫原性上与天然N蛋白具有较高相似性,可作为诊断用抗原,从而为进一步开发犬瘟热抗体检测试剂盒以及单克隆抗体、胶体金试纸条奠定了基础。
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| 关 键 词： | 犬瘟热病毒 核衣壳蛋白基因 原核表达 间接ELISA 犬瘟热 病毒 蛋白基因 原核表达 indirect ELISA 检测方法 detection development nucleocapsid protein virus canine distemper expression Prokaryotic 胶体金试纸条 单克隆抗体 检测试剂盒 开发 诊断用抗原 相似性 免疫原性 |
Prokaryotic expression of canine distemper virus nucleocapsid protein and development of indirect ELISA for detection of it's antibody |
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| YUAN Bao,WANG Chen,REN Wen-zhi,ZHANG Jia-bao,ZHAO Zhi-hui.Prokaryotic expression of canine distemper virus nucleocapsid protein and development of indirect ELISA for detection of it's antibody[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2008,28(7). |
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| Authors: | YUAN Bao WANG Chen REN Wen-zhi ZHANG Jia-bao ZHAO Zhi-hui |
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