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| 金黄色葡萄球菌肠毒素A在枯草芽孢杆菌中的表达及其活性分析 | |
| 引用本文： | 韩佳丽,李昌,沈国顺,胡博,李霄,田明尧,孙珊珊,叶明,金宁一.金黄色葡萄球菌肠毒素A在枯草芽孢杆菌中的表达及其活性分析[J].中国兽医学报,2010,30(3). |
| 作者姓名： | 韩佳丽 李昌 沈国顺 胡博 李霄 田明尧 孙珊珊 叶明 金宁一 |
| 作者单位： | 1. 沈阳农业大学畜牧兽医学院,辽宁,沈阳,110161;军事医学科学院,军事兽医研究所,吉林,长春,130062 2. 军事医学科学院,军事兽医研究所,吉林,长春,130062 3. 沈阳农业大学畜牧兽医学院,辽宁,沈阳,110161 4. 延边大学,农学院,吉林,龙井,133400 |
| 基金项目： | 科技部863计划(2006AA02Z447); 军内十一五科技攻关项目(06G127); 长春市科技局重点项目(2007KZ19) |
| 摘 要： | 利用优化后的SEA基因片段与带有枯草芽孢杆菌启动子的表达载体pBC38c,成功构建了含有SEA基因的重组表达质粒pBC38c-SEA。通过电转化的方法,将重组质粒pBC38c-SEA转入枯草芽孢杆菌1A751中。对目的蛋白进行表达,采用硫酸铵沉淀法浓缩上清中的蛋白,超声波裂解法裂解菌体沉淀,SDS-PAGE凝胶电泳法检测蛋白表达情况,Western-blot对表达的目的蛋白进行活性分析,并对表达条件与硫酸铵浓度进行优化。结果表明,成功构建了枯草芽孢杆菌表达质粒pBC38c-SEA,并在枯草芽孢杆菌中获得了表达,目的蛋白存在于培养基上清中,且具有抗原性。随着培养时间的延长,目的蛋白表达产量增多,在35h时达到最多,同时硫酸铵终浓度为50%,目的蛋白得到最好沉淀。本试验结果表明,SEA基因得以分泌表达,为进一步研究其生物活性并作为佐剂在临床中应用奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 金黄色葡萄球菌肠毒素A 枯草芽孢杆菌 分泌表达 |
Expression and activity of Staphylococcus aureus enterotoxin A in Bacillus subtilis |
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| HAN Jia-li,LI Chang,SHEN Guo-shun,HU Bo,LI Xiao,TIAN Ming-yao,SUN Shan-shan,YE Ming,JIN Ning-yi.Expression and activity of Staphylococcus aureus enterotoxin A in Bacillus subtilis[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2010,30(3). | |
| Authors: | HAN Jia-li LI Chang SHEN Guo-shun HU Bo LI Xiao TIAN Ming-yao SUN Shan-shan YE Ming JIN Ning-yi |
| Institution: | HAN Jia-li1,2,LI Chang2,SHEN Guo-shun1,HU Bo2,LI Xiao2,TIAN Ming-yao2,SUN Shan-shan1,YE Ming3,JIN Ning-yi2 (1.College of Animal Science , Veterinary Medicine,Agricultural University of Shenyang,Shenyang 110161,China,2.Military Veterinary Institute,Academy of Military Medical Sciences,Changchun 130062,3.Agricultural College,Yanbian University,Longjing,Jilin 133400,China) |
| Abstract: | The recombinant plasmid pBC38c-SEA containing gene fragment of Staphylococcal enterotoxin A(SEA)was constructed by the expression vector pBC38c with the promoter of Bacillus subtilis.Then the recombinant plasmid pBC38c-SEA was transformed into Bacillus subtilis 1A751 by electrotransformation.For the purpose of protein expression,supernatant protein was concentrated by ammonium sulfate precipitation and bacterial precipitation was lysised by sonic disruption.SDS-PAGE gel electrophoresis was used to detect pr... |
| Keywords: | Staphylococcal enterotoxin A Bacillus subtilis secretory expression |
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