| 猪α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定 |
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| 引用本文： | 姚清侠,钱平,曹毅,徐卓菲,何雁南,陈焕春.猪α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定[J].中国兽医学报,2008,28(12). |
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| 作者姓名： | 姚清侠 钱平 曹毅 徐卓菲 何雁南 陈焕春 |
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| 作者单位： | 华中农业大学畜牧兽医学院,湖北,武汉,430070 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)
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湖北省科技攻关项目
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| 摘 要： | 利用基因工程技术,将编码梅山猪α-干扰素成熟蛋白基因(mPoIFNα,501 bp)亚克隆到含分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFNα。用化学方法(LiCl)将线性化的mPoIFNα与ssDNA共转化入毕赤酵母菌株GS115,转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后,得到的阳性菌株再以高浓度的G418筛选多拷贝重组子。该高拷贝菌株经1%甲醇连续诱导4 d,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,结果表明在毕赤酵母中猪α-干扰素获得分泌型表达,表达产物约为20 000,在GS115中的表达量约为40mg/L,占GS115表达的可分泌型总蛋白的40.1%。对表达产物进行理化分析发现,重组酵母菌表达的蛋白耐酸(pH2),对热(56℃)部分敏感,并能被特异性抗猪α-干扰素抗体中和而不与抗猪γ-干扰素抗体反应。细胞病变抑制法(CPE50)测定干扰素生物活性,试验结果表明rPolIFNα具有较高的抗病毒生物活性,在MDBK中的抗VSV比活性为8.0×106U/mg。
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| 关 键 词： | 猪α-干扰素 毕赤酵母 分泌表达 抗病毒活性 |
Secreting expression of porcine interferon-alpha in Pichia pastoris and its antiviral activity |
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| YAO Qing-xia,QIAN Ping,CAO Yi,XU Zhuo-fei,HE Yan-nan,CHEN Huan-chun.Secreting expression of porcine interferon-alpha in Pichia pastoris and its antiviral activity[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2008,28(12). |
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| Authors: | YAO Qing-xia QIAN Ping CAO Yi XU Zhuo-fei HE Yan-nan CHEN Huan-chun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcine interferon-apha Pichia pastoris secreting expression antiviral activity |
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