| 实时荧光定量PCR检测PrP基因表达标准品质粒和标准曲线的构建 |
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| 引用本文： | 宁章勇,赵德明,杨建民,崔亚利,孟丽平,吴长德,秦秀慧,马李颖.实时荧光定量PCR检测PrP基因表达标准品质粒和标准曲线的构建[J].中国兽医学报,2005,25(6):611-613. |
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| 作者姓名： | 宁章勇 赵德明 杨建民 崔亚利 孟丽平 吴长德 秦秀慧 马李颖 |
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| 作者单位： | 中国农业大学,国家动物传染性海绵状脑病实验室,北京,100094 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（30371062）;教育部博士点基金资助项目（20020019006） |
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| 摘 要： | 对金黄地鼠P rP基因序列进行分析,选择其高度保守区域设计引物,对金黄地鼠各组织提取mRNA,经RT-PCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选后得到重组标准品质粒,对重组标准品质粒进行酶切、PCR和测序鉴定,表明P rP基因保守区段已经成功克隆。将107~102拷贝/反应的重组标准品质粒进行荧光定量PCR,10次重复C t值平均分别为17.50±0.5、21.38±0.2、25.29±0.7、29.12±0.7、31.34±0.4、33.89±0.1,系统自动分析软件显示C t值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系,回归系数为0.998。对动力学曲线分析表明,在该反应体系和反应条件下,该标准曲线的灵敏度为102拷贝/反应。荧光PCR P rP基因表达检测标准品质粒和标准曲线的建立,为检测P rP基因的组织特异性表达和动物传染性海绵状脑病发生的分子机理奠定了基础。
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| 关 键 词： | 实时荧光定量PCR PrP基因 标准曲线 重组质粒 动物传染性海绵状脑病 |
| 文章编号： | 1005-4545(2005)06-0611-03 |
| 收稿时间： | 2004-06-07 |
| 修稿时间： | 2004年6月7日 |
Construction of Recombinant Plasmid and Standard Curve for Detection of PrP Gene Expression by Real-time Quantitative PCR |
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| NING Zhang-yong,ZHAO De-ming,YANG Jian-min,CUI Ya-li,MENG Li-ping,WU Chang-de,QIN Xiu-hui,MA Li-ying.Construction of Recombinant Plasmid and Standard Curve for Detection of PrP Gene Expression by Real-time Quantitative PCR[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2005,25(6):611-613. |
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| Authors: | NING Zhang-yong ZHAO De-ming YANG Jian-min CUI Ya-li MENG Li-ping WU Chang-de QIN Xiu-hui MA Li-ying |
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| Institution: | NING Zhang-yong,ZHAO De-ming~*,YANG Jian-min,CUI Ya-li,MENG Li-ping,WU Chang-de,QIN Xiu-hui,MA Li-ying |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | real-time fluorescent quantitative PCR PrP gene standard curve recombinant plasmid animal transmissible spongiform encephalopathies |
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