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| 洼地绵羊防御素sBD-1基因克隆、序列分析及SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法的建立与应用 | |
| 引用本文： | 王金良,郭显坡,沈志强,李敏,任艳玲.洼地绵羊防御素sBD-1基因克隆、序列分析及SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法的建立与应用[J].中国兽医学报,2011,31(5). |
| 作者姓名： | 王金良 郭显坡 沈志强 李敏 任艳玲 |
| 作者单位： | 1. 山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州,256600 2. 山东绿都生物科技有限公司,山东滨州,256600 3. 山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;山东绿都生物科技有限公司,山东滨州256600;山东省洼地绵羊繁育技术研究推广中心,山东滨州256600 4. 山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;山东省洼地绵羊繁育技术研究推广中心,山东滨州256600 |
| 基金项目： | 国家"863"计划资助项目，山东省自然科学基金资助项目，山东省良种工程资助项目 |
| 摘 要： | 根据GenBank上登录的绵羊防御素基因序列,经多重比较后,设计1对引物,从洼地绵羊舌上皮组织中扩增到防御素sBD-1基因,克隆到pMD18-T载体中进行测序.结果表明,扩增基因全长215 bp,编码64个氨基酸.基因进化树分析表明,与蒙古绵羊sBD-1基因有较近的亲缘关系,核苷酸同源性为98.5%;而与黄牛的亲缘关系最远,核苷酸同源性84.6%.氨基酸序列分析表明,序列内无信号肽区域,具有3个潜在的抗原表位.以pMD18-T/sBD-1质粒为模板建立了sBD-1基因SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,核酸电泳、扩增动力学曲线、溶解曲线及重复性试验表明,检测方法具有良好的稳定性和特异性,得到的回归方程(R2=0.998)表明PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在良好的线性关系,从舌、盲肠及输卵管等组织中可以进行有效的检测,检测灵敏度为83.9 copies/μL.该方法为进一步研究防御素sBD-1基因在洼地绵羊抗逆性过程中的作用奠定了基础. |
| 关 键 词： | 洼地绵羊 sBD-1基因 序列分析 荧光定量 |
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