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口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的克隆及3AB基因的原核表达
引用本文:曹轶梅,刘在新,卢曾军,胡永浩,常惠芸,谢庆阁.口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的克隆及3AB基因的原核表达[J].中国兽医学报,2004,24(1):31-34.
作者姓名:曹轶梅  刘在新  卢曾军  胡永浩  常惠芸  谢庆阁
作者单位:1. 中国农业科学院,兰州兽医研究所农业部病毒学重点实验室,甘肃,兰州,730046
2. 甘肃农业大学,甘肃,兰州,730070
基金项目:国家“973”计划资助项目 ( G19990 1190 1)
摘    要:从感染口蹄疫病毒 (foot- and- m outh disease virus,FMDV)的细胞中提取总 RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT- PCR)获得了长度约为 14 0 0 bp的核酸片段 ,与预期长度相符。扩增产物经克隆后 ,测序证明其含有完整的 3ABC基因。该序列与国外参考序列 0 1K/ 6 6相比 ,同源性在 99%以上。亚克隆 3ABC基因至表达载体 p Tri Ex- 4 Neo中 ,通过序列分析发现 ,克隆到 p Tri Ex- 4 Neo载体上的片段于 3ABC基因 70 9~ 72 5 bp之间有 17bp的缺失 ,碰巧在 3AB基因后形成一终止密码子 ,但 3AB基因的阅读框架完整。选出含有 3AB基因完整阅读框架的阳性克隆 ,用 IPTG诱导表达 ,收集菌液进行 SDS- PAGE电泳、Western blotting分析 ,结果表明 ,3AB基因在大肠杆菌中成功表达 ,其表达产物为分子质量 33.5 ku的融合蛋白 ,并能被口蹄疫病毒阳性血清识别。经薄层扫描分析 ,表达的目的蛋白占总蛋白量的 2 6 %以上。该项研究为应用重组 FMDV非结构蛋白为抗原建立感染和免疫的鉴别诊断方法提供了依据

关 键 词:口蹄疫病毒  3ABC基因  3AB基因  克隆  表达
文章编号:1005-4545(2004)01-0031-03
修稿时间:2002年11月8日

Cloning of the Nonstructural Protein 3ABC Gene of Foot-and-Mouth Disease Virus and Expression of the 3AB Gene in E.Coli
CAO Yi-mei,LIU Zai-xin.Cloning of the Nonstructural Protein 3ABC Gene of Foot-and-Mouth Disease Virus and Expression of the 3AB Gene in E.Coli[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2004,24(1):31-34.
Authors:CAO Yi-mei  LIU Zai-xin
Institution:CAO Yi-mei~1,LIU Zai-xin~
Abstract:
Keywords:FMDV  3ABC Ggene  3AB gene  clone  expression
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