| 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆及其在毕赤酵母中表达 |
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| 引用本文： | 黄小波,钱洪喜,曹三杰,文心田,马小平.猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆及其在毕赤酵母中表达[J].中国兽医学报,2013,33(8). |
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| 作者姓名： | 黄小波 钱洪喜 曹三杰 文心田 马小平 |
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| 作者单位： | 四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室四川省动物疫病与人类健康重点实验室,四川雅安,625014 |
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| 基金项目： | 国家公益性行业(农业)科研专项资助项目，教育部《长江学者和创新团队发展计划》创新团队资助项目 |
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| 摘 要： | 用RT-PCR扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重庆分离株C14-2的ORF7基因(384 bp),构建克隆质粒pMD19-T-ORF7,经EcoR Ⅰ /Not Ⅰ双酶切回收ORF7基因插入酵母表达载体pPIC9K,构建了重组表达质粒pPIC9K-ORF7,进行PCR鉴定和双酶切鉴定.鉴定的pPIC9K-ORF7经Sac Ⅰ线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,筛选获得阳性重组菌GS115(pPIC9K-ORF7),再经G-418/YPD筛选获得高拷贝重组菌,重组子经表型鉴定为Mut.重组菌GS115(pPIC9K-ORF7)经甲醇诱导表达,在96 h表达的N蛋白量最大,N蛋白经SDS-PAGE鉴定大小约为15 000;Western blot表明N蛋白能与美洲型PRRSV阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应活性.本研究为开展PRRSV ORF7基因在毕赤酵母中表达及应用奠定基础.
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF7基因 毕赤酵母 |
Cloning of ORF7 gene of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and its expression in Pichia pastoris |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcine reproductive and respiratory syndrome ORF7 gene P pastoris |
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