鸡RORα真核表达载体的构建及其在MSB1细胞中的表达 |
| |
引用本文: | 尤钊,左珂朦,余祖华,丁轲,王垚垚,刘彤,张梦珂,邱静静.鸡RORα真核表达载体的构建及其在MSB1细胞中的表达[J].中国畜牧兽医,2018(7). |
| |
作者姓名: | 尤钊 左珂朦 余祖华 丁轲 王垚垚 刘彤 张梦珂 邱静静 |
| |
作者单位: | 河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室;河南科技大学宏翔生物饲料实验室 |
| |
摘 要: | 为构建鸡维甲酸相关孤核受体α(retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα)的真核表达载体,并检测其在MSB1细胞中的表达效果,本研究参照GenBank中鸡RORα基因序列(登录号:NM_001289887.1)设计特异性引物,从鸡肝脏组织中提取总RNA,经反转录合成cDNA,以此为模板进行PCR扩增,将扩增的特异性RORα基因片段连接pMD18-T载体,构建克隆载体pMD18-T-RORα,再用SalⅠ和BamHⅠ双酶切克隆载体pMD18-T-RORα和真核表达载体pEGFP-N1,将酶切回收的RORα与pEGFP-N1片段进行连接,构建重组真核表达载体pEGFP-N1-RORα,经PCR、酶切和测序验证准确性后,将其转染MSB1细胞,于转染后48h荧光显微镜下观察EGFP的表达情况,并采用实时荧光定量PCR检测鸡RORα在MSB1细胞中的表达水平。结果显示,从构建的重组质粒pEGFP-N1-RORα中可扩增出大小约1 600bp的特异性片段,用SalⅠ和BamHⅠ可切出大小约4 700和1 600bp的两条带。实时荧光定量PCR结果显示,转染MSB1细胞48h后,与对照组相比,重组真核表达载体转染组中鸡RORα基因mRNA水平显著增加(P0.05)。表明本试验成功构建了鸡RORα的真核表达载体,该载体可在MSB1细胞中表达鸡RORα,为进一步研究鸡RORα对MSB1细胞增殖的影响奠定基础。
|
本文献已被 CNKI 等数据库收录! |
|