| 家蚕JAB1/CSN5蛋白的基因克隆表达及亚细胞定位 |
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| 引用本文： | 许红,姚斐,盛清,吕正兵,陈健,聂作明,王丹,刘立丽,沈红丹,舒建洪,舒特俊,陈剑清,吴祥甫,张耀洲.家蚕JAB1/CSN5蛋白的基因克隆表达及亚细胞定位[J].蚕业科学,2009,35(3). |
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| 作者姓名： | 许红 姚斐 盛清 吕正兵 陈健 聂作明 王丹 刘立丽 沈红丹 舒建洪 舒特俊 陈剑清 吴祥甫 张耀洲 |
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| 作者单位： | 1. 浙江理工大学生物化学研究所,浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州,310018
2. 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所,上海,200031 |
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| 基金项目： | 国家高科技研究发展计划"863"项目，浙江省自然科学基金项目 |
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| 摘 要： | JAB1/CSN5是COP9信号复合体(constitutive photomorphogenic signalosome CSN)的第5个亚基,内嵌的JAMM基序是CSN参与蛋白的泛素化降解途径并调控生物体生长发育过程的异构酶活性位点。在家蚕蛹cDNA文库中筛选到的一条基因序列,其ORF长度为1047 bp,预测编码蛋白含有JAB1/CSN5保守结构域JAB-MPN,因此命名为BmJM。将BmJM基因的ORF插入到载体pET-28a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28a(+)-BmJM,于E.coliRosetta菌中进行原核表达,重组蛋白以包涵体形式存在。以纯化后的重组蛋白为抗原免疫大白兔获得BmJM的多克隆抗体,采用RT-PCR、Western blotting方法对BmJM基因在家蚕不同发育时期和组织中的转录及蛋白表达水平进行分析,发现BmJM蛋白在家蚕5龄幼虫的生殖腺表达量最高,而在其他组织中表达量较少,由此初步揭示了JAB1/CSN5在家蚕生长发育过程中的作用。亚细胞定位测定表明BmJM蛋白在细胞质近核区域含量最高,在细胞核中也有分布。
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| 关 键 词： | 家蚕 COP9信号复合体 JAB1/CSN5蛋白 基因克隆 序列分析 荧光定量PCR 亚细胞定位 |
Gene Cloning,Expression and Subcellular Localization of JAB1/CSN5 Protein From Silkworm,Bombyx mori |
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| XU Hong,YAO Fei,SHENG Qing,L Zheng-Bing,CHEN Jian,NIE Zuo-Ming,WANG Dan,LIU Li-Li,SHEN Hong-Dan,SHU Jian-Hong,SHU Te-Jun,CHEN Jian-Qing,WU Xiang-Fu,ZHANG Yao-Zhou.Gene Cloning,Expression and Subcellular Localization of JAB1/CSN5 Protein From Silkworm,Bombyx mori[J].Acta Sericologica Sinica,2009,35(3). |
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| Authors: | XU Hong YAO Fei SHENG Qing L Zheng-Bing CHEN Jian NIE Zuo-Ming WANG Dan LIU Li-Li SHEN Hong-Dan SHU Jian-Hong SHU Te-Jun CHEN Jian-Qing WU Xiang-Fu ZHANG Yao-Zhou |
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| Institution: | XU Hong,YAO Fei,SHENG Qing,L(U) Zheng-Bing,CHEN Jian,NIE Zuo-Ming,WANG Dan,LIU Li-Li,SHEN Hong-Dan,SHU Jian-Hong,SHU Te-Jun,CHEN Jian-Qing,WU Xiang-Fu,ZHANG Yao-Zhou |
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| Abstract: | JAB1/CSN5 is the fifth subunit of COP9 signalosome(constitutive photomorphogenic signalosome CSN).JAMM motif embedded in JAB1/CSN5 has the isopeptidase activity in CSN,which functions in the ubiquitin-proteasome pathway and in the regulation of developmental processes of organism.From the large-scale screening in the cDNA library which has been constructed by our institute,a gene containing 1 047 bp ORF was identified.The predicted protein has a domain(JAB-MPN) which is conserved in the JAB1/CSN5.Thus we na... |
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| Keywords: | Bombyx mori COP9 signalosome JAB1/CSN5 protein Gene cloning Sequence analysis RT-PCR Subcellular localization |
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