| 家蚕脂围蛋白(PLIN)基因的序列分析及表达与亚细胞定位研究 |
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| 引用本文： | 姚斐,许红,舒特俊,盛清,吕正兵,陈健,聂作明,王丹,刘立丽,沈红丹,舒建洪,陈剑清,吴祥甫,张耀洲.家蚕脂围蛋白(PLIN)基因的序列分析及表达与亚细胞定位研究[J].蚕业科学,2009,35(4). |
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| 作者姓名： | 姚斐 许红 舒特俊 盛清 吕正兵 陈健 聂作明 王丹 刘立丽 沈红丹 舒建洪 陈剑清 吴祥甫 张耀洲 |
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| 作者单位： | 1. 浙江理工大学生物化学研究所,浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州,310018
2. 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所,上海,200031 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划"973"项目，国家高技术研究发展计划"863"项目 |
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| 摘 要： | 脂围蛋白(perilipin)与脂肪细胞脂类代谢的调节有关。从家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条cDNA开放阅读框(ORF)序列长度为918 bp的基因,预测其编码305个氨基酸残基,蛋白分子质量约32.5 kD。经NCBI比对发现该蛋白具有部分脂围蛋白的保守结构域,因此将该ORF序列命名为BmPLIN基因。将该基因插入到载体pET-28a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28a(+)-BmPLIN,并转化大肠杆菌中进行原核表达得到带有His标签的融合蛋白,表达的融合蛋白以包涵体形式存在。用纯化后的融合蛋白为抗原免疫大白兔获得多克隆抗体,ELISA间接法测定抗体的效价达到1∶12 800以上。通过荧光定量PCR和Western blotting技术对BmPLIN基因及其编码蛋白在家蚕5龄幼虫各个组织器官中的转录、表达水平进行分析的结果是:BmPLIN基因mRNA在家蚕5龄幼虫各组织器官中的转录水平由高到低依次为生殖腺(卵巢和睾丸)、脂肪体、肠、表皮、头部、马氏管、丝腺、气门,在家蚕5龄幼虫的生殖腺(卵巢和睾丸)中有明显的BmPLIN蛋白特异条带。以家蚕Bm5细胞进行免疫细胞实验的结果显示,BmPLIN蛋白在细胞质和细胞核中均有分布。
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| 关 键 词： | 家蚕 脂围蛋白 蛋白纯化 基因表达 亚细胞定位 |
Sequence Analysis,Expression and Subcellular Localization of Perilipin(PLIN) Gene in the Silkworm,Bombyx mori |
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| YAO Fei,XU Hong,SHU Te-Jun,SHENG Qing,L Zheng-Bing,CHEN Jian,NIE Zuo-Ming,WANG Dan,LIU Li-Li,SHEN Hong-Dan,SHU Jian-Hong,CHEN Jian-Qing,WU Xiang-Fu,ZHANG Yao-Zhou.Sequence Analysis,Expression and Subcellular Localization of Perilipin(PLIN) Gene in the Silkworm,Bombyx mori[J].Acta Sericologica Sinica,2009,35(4). |
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| Authors: | YAO Fei XU Hong SHU Te-Jun SHENG Qing L Zheng-Bing CHEN Jian NIE Zuo-Ming WANG Dan LIU Li-Li SHEN Hong-Dan SHU Jian-Hong CHEN Jian-Qing WU Xiang-Fu ZHANG Yao-Zhou |
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| Institution: | YAO Fei,XU Hong,SHU Te-Jun,SHENG Qing,L(U) Zheng-Bing,CHEN Jian,NIE Zuo-Ming,WANG Dan,LIU Li-Li,SHEN Hong-Dan,SHU Jian-Hong,CHEN Jian-Qing,WU Xiang-Fu,ZHANG Yao-Zhou |
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| Abstract: | Perilipin protein is involved in lipid metabolism in adipocytes.A cDNA with 918 bp open reading frame(ORF) was obtained through screening the previously constructed cDNA library for pupal stage of the silkworm,Bombyx mori.The ORF encodes a perilipin protein of 305 amino acid residues with a predicted molecular weight of 32.5 kD.Sequence alignment on NCBI website revealed that the protein has a conservative structural domain of perilipin and was thus named BmPLIN.After the ORF was cloned into the prokaryotic... |
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| Keywords: | Bombyx mori Perilipin Protein purification Gene expression Subcellular localization |
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