| 一种高效的苹果褪绿叶斑病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法 |
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| 引用本文： | 秦子禹,孙建设,王娜,邵建柱.一种高效的苹果褪绿叶斑病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法[J].植物保护学报,2015,42(4):551-556. |
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| 作者姓名： | 秦子禹 孙建设 王娜 邵建柱 |
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| 作者单位： | 河北农业大学园艺学院, 保定 071001;河北科技师范学院园艺科技学院, 昌黎 066600;河北农业大学园艺学院, 保定 071001;河北科技师范学院园艺科技学院, 昌黎 066600;河北农业大学园艺学院, 保定 071001 |
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| 基金项目： | 国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-28) |
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| 摘 要： | 为建立一种检测苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)的Taq Man探针实时荧光定量RT-PCR方法,根据ACLSV外壳蛋白基因(coat protein,cp)保守序列设计了特异性引物和Taq Man探针,以构建的ACLSV-cp重组质粒为阳性标准品绘制标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行检验。结果显示,以ACLSV-cp重组质粒为标准品建立的标准曲线相关系数达0.999,扩增效率为103.7%;建立的Taq Man探针实时荧光定量RT-PCR方法特异性好,与苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)、苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)均无交叉反应;灵敏度为100拷贝/μL,比常规RT-PCR高100倍;批内和批间变异系数均小于0.84%。表明Taq Man探针实时荧光定量RT-PCR方法具有特异性强、灵敏性高、重复性好的优点,适用于实际样品中ACLSV的快速准确检测。
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| 关 键 词： | 苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV) TaqMan探针 实时荧光定量RT-PCR |
| 收稿时间： | 2014/12/1 0:00:00 |
An efficient TaqMan real-time RT-PCR assay for detecting Apple chlorotic leaf spot virus (ACLSV) |
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| Qin Ziyu,Sun Jianshe,Wang Na and Shao Jianzhu.An efficient TaqMan real-time RT-PCR assay for detecting Apple chlorotic leaf spot virus (ACLSV)[J].Acta Phytophylacica Sinica,2015,42(4):551-556. |
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| Authors: | Qin Ziyu Sun Jianshe Wang Na and Shao Jianzhu |
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| Institution: | College of Horticulture, Agricultural University of Hebei, Baoding 071001, Hebei Province, China;Horticultural College of Science & Technology, Hebei Normal University of Science & Technology, Changli 066600, Hebei Province, China;College of Horticulture, Agricultural University of Hebei, Baoding 071001, Hebei Province, China;Horticultural College of Science & Technology, Hebei Normal University of Science & Technology, Changli 066600, Hebei Province, China;College of Horticulture, Agricultural University of Hebei, Baoding 071001, Hebei Province, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Apple chlorotic leaf spot virus (ACLSV) TaqMan probe real-time RT-PCR |
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