番茄褐色皱果病毒SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测方法的建立和应用

根据番茄褐色皱果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)外壳蛋白(coat protein,CP)的保守基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR Green I的ToBRFV实时荧光RT-PCR检测方法,并对其进行了特异性、灵敏度检测,对自然感染ToBRFV的番茄、辣椒种子进行了检测验证。结果表明,构建的实时荧光RT-PCR检测ToBRFV阳性的番茄种子总RNA和重组质粒标准品的检测低限分别为0.2 ng/μL和50.0拷贝/μL,均为普通RT-PCR检测灵敏度的100倍;对番茄花叶病毒(tomato mosaic virus,ToMV)、番茄环斑病毒(tomato ringspot virus,ToRSV)、番茄黑环病毒(tomato black ring virus,TBRV)、番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)、辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMoV)、烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)和烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus,TRSV)等7种病毒均无扩增反应,具有很好的特异性。对50份疑似感染了ToBRFV的番茄和辣椒种子样品检测结果表明,与常规RT-PCR和已报道的2种实时荧光RT-PCR方法相比,本研究建立的实时荧光RT-PCR方法具有准确率高、特异性强、灵敏度高的特点,适用于低丰度ToBRFV的种子检测。