| 采用Percoll法分离、纯化鲫肝细胞 |
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| 引用本文： | 张高峰,郭彤,魏华,马珂.采用Percoll法分离、纯化鲫肝细胞[J].中国水产科学,2007,14(2):208-214. |
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| 作者姓名： | 张高峰 郭彤 魏华 马珂 |
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| 作者单位： | 上海水产大学,生命科学与技术学院,教育部水产养殖重点实验室,上海,200090 |
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| 基金项目： | 上海市教委资助项目;上海市重点学科建设项目;上海水产大学校科研和教改项目 |
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| 摘 要： | 以Ⅳ型胶原酶消化法分离鲫(Carassius auratus)肝细胞,然后将其分成2组,一组不再经过进一步处理(即对照组);另一组再用Percoll液密度梯度离心纯化肝细胞(即实验组),然后将2组细胞接种于DMEM/F12培养基中培养10 d。在倒置显微镜下观察2组肝细胞的形态并绘制细胞生长曲线;采用台盼蓝染色法比较2组肝细胞的存活率;通过HE染色法在光镜下检测肝细胞的纯度;采用MTT比色法测定2组肝细胞的增殖率;收集肝细胞培养上清液检测白蛋白、尿素以及乳酸脱氢酶的水平以检测2组肝细胞功能。结果表明,对照组鲫肝细胞存活率为80.6%,纯度为83.2%;实验组肝细胞存活率和纯度明显高于对照组(P<0.05),分别为94.2%和95.1%。实验中发现,从开始接种到大部分肝细胞贴壁生长,实验组比对照组肝细胞的增殖明显加快(P<0.05)。白蛋白分泌功能、尿素合成能力及乳酸脱氢酶检测结果表明,实验组培养上清液中白蛋白分泌量、尿素合成能力明显高于对照组(P<0.05);而乳酸脱氢酶含量明显低于对照组(P<0.05)。结论认为,用Percoll梯度液分离纯化肝细胞,可提高肝实质细胞纯度和活力,适合体外原代培养。
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| 关 键 词： | 鲫 肝细胞 分离 纯化 Percoll法 |
| 文章编号： | 1005-8737-（2007）02-0208-07 |
| 收稿时间： | 2006-05-30 |
| 修稿时间： | 2006-09-21 |
Isolation and purification of Carassius auratus hepatocytes by the method of Percoll |
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| ZHANG Gao-feng,GUO Tong,WEI Hua,MA Ke.Isolation and purification of Carassius auratus hepatocytes by the method of Percoll[J].Journal of Fishery Sciences of China,2007,14(2):208-214. |
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| Authors: | ZHANG Gao-feng GUO Tong WEI Hua MA Ke |
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| Institution: | Key Laboratory of Aquaculture, the Ministry of Education, College of Aqua-life Science and Technology, Shanghai Fisheries University, Shanghai 200090, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Carassius auratus hepatocytes isolation purified Percoll |
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