| 鲤肠道小肽转运载体PepT1多克隆抗体的制备及其组织表达分析 |
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| 引用本文： | 闫潇,杨丽萍,郑文佳,孙君君,卢荣华,聂国兴.鲤肠道小肽转运载体PepT1多克隆抗体的制备及其组织表达分析[J].中国水产科学,2016,23(3):513-521. |
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| 作者姓名： | 闫潇 杨丽萍 郑文佳 孙君君 卢荣华 聂国兴 |
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| 作者单位： | 河南师范大学水产学院,河南新乡,453007 |
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| 基金项目： | 河南省高校科技创新团队支持计划项目(14IRTSTHN013) |
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| 摘 要： | 为从蛋白水平研究小肽转运载体(PepT1)在鲤(Cyprinus carpio L.)不同组织中的表达及分布规律,本研究采用PCR法获得PepT1 cDNA片段,并转化至大肠杆菌Rosetta,对目标多肽进行原核表达,将Pep T1重组蛋白纯化后免疫新西兰长耳兔(Oryctolagus cuniculus),获取兔抗鲤PepT1多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,免疫组化检测PepT1的组织表达情况,并用荧光实时定量PCR技术检测PepT1转录水平组织表达情况。结果显示,目标多肽分子量约为28 kD;抗体效价达到4×10~5。PepT1在鲤的前肠、中肠、后肠、脾、肝胰脏和肾中均有表达。肠道组织PepT1的高表达与其主要完成食物中肽的吸收功能密切相关,且吸收部位主要集中在前肠和中肠;肾中PepT1免疫染色阳性区域也较为明显,这与肾小管基底膜存在对短肽的重吸收功能相关。此外,肝胰脏和脾PepT1也有一定量的表达,可能与这两个重要器官代谢旺盛有关。本研究制备的兔抗鲤PepT1多克隆抗体能够有效识别鲤各组织中的PepT1蛋白,在后续研究中亦可用于其他鱼类PepT1转运蛋白的表达定位和定量研究。
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| 关 键 词： | 鲤 PepT1 原核表达 抗体效价 组织表达 |
| 修稿时间： | 2016/5/18 0:00:00 |
Preparation of the antibody and tissue distribution of the peptide transporter PepT1 in Cyprinus carpio L. |
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| YAN Xiao,YANG Liping,ZHENG Wenji,SUN Junjun,LU Ronghu,NIE Guoxing.Preparation of the antibody and tissue distribution of the peptide transporter PepT1 in Cyprinus carpio L.[J].Journal of Fishery Sciences of China,2016,23(3):513-521. |
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| Authors: | YAN Xiao YANG Liping ZHENG Wenji SUN Junjun LU Ronghu NIE Guoxing |
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| Institution: | College of Fisheries, Henan Normal University, Xinxiang 453007, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cyprinus carpioL prokaryotic expression antibody titer tissue distribution |
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