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半滑舌鳎 WT1a 基因的克隆与性别分化期的表达分析
引用本文:张红,陈松林,刘洋,温海深,朱颖.半滑舌鳎 WT1a 基因的克隆与性别分化期的表达分析[J].中国水产科学,2014,21(1):26-36.
作者姓名:张红  陈松林  刘洋  温海深  朱颖
作者单位:1. 中国海洋大学 水产学院, 山东 青岛 266003; 2. 中国水产科学研究院 黄海水产研究所, 农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室, 山东 青岛 266071;3. 大连海洋大学 水产与生命学院, 辽宁 大连 116023
基金项目:国家自然科学基金项目(31072202); 国家863计划项目(2012AA092203); 农业部公益性行业科研专项(200903046); 山东省泰山学者工程专项.
摘    要:

从半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)全基因组序列中获得肿瘤抑制基因 WT1a 的部分序列, 然后利用 RACE 技术克隆了WT1a 基因的全长, 运用组织学方法, 对半滑舌鳎性腺分化早期的组织切片进行了观察, 并分析了该阶段WT1a 的表达特征。克隆结果显示, WT1a 基因cDNA全长为1 886 bp, 开放阅读框(ORF)长为1 470 bp, 编码490个氨基酸, 并且包含 KTS 三肽, 5′-UTR 3′-UTR 分别长为245 bp 171 bp。在 ORF 末端发现2个微卫星(SSR)序列和2个跨膜螺旋区域, 而在其他物种中未发现这些区域。氨基酸序列分析显示, WT1a 基因的保守性很高, 与人的同源性高达90%。通过组织切片观察发现, 该批半滑舌鳎在56 d时性腺开始分化, 并且卵巢分化早于精巢。荧光实时定量分析结果显示, WT1a 在半滑舌鳎成鱼性腺中表达量显著高于其他各组织, 在肝、肾、脾、心脏等组织中有微量表达, 并且在成鱼性腺中, 雄鱼表达量显著高于雌鱼, 雌鱼显著高于伪雄鱼。在胚胎发育各时期以及初出膜后WT1a的表达结果显示, 12 h (原肠早期)显著升高, 20 h (神经胚期)达到最高。在性腺分化早期雌雄性腺中的表达结果显示, WT1a 在雌雄半滑舌鳎16~66 d 的性腺中表达量持续平稳升高, 在性腺分化时期表达量并没有特殊的变化。这些研究结果说明, WT1a 基因是半滑舌鳎性别相关基因, 并在半滑舌鳎的性腺分化、发育过程中持续表达, 但可能对性腺的分化过程并不起决定作用。



关 键 词:半滑舌鳎    性别相关基因    WT1a    实时荧光定量PCR
修稿时间:2015/6/30 0:00:00

WT1a gene molecular cloning and expression analysis during gender differentiation in half-smooth tongue sole (Cynoglossus semilaevis)
ZHANG Hong,CHEN Songin,LIU Yang,WEN Haisheng,ZHU Ying.WT1a gene molecular cloning and expression analysis during gender differentiation in half-smooth tongue sole (Cynoglossus semilaevis)[J].Journal of Fishery Sciences of China,2014,21(1):26-36.
Authors:ZHANG Hong  CHEN Songin  LIU Yang  WEN Haisheng  ZHU Ying
Institution:1. College of Fisheries, Ocean University of China, Qingdao 266003, China;2. Key Labfor Sustainable Utilization of Marine Fisheries Resources, Ministry of Agriculture; Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 2
Abstract:
Keywords:Cynoglossus semilaevis  gender related gene  WT1a  rea1-time PCR
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