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以重复序列为靶位点的鳜鱼多位点基因打靶载体的构建
引用本文:唐冬生,严霞,李芳,张细权,蒋泓,于辉,高东,李月琴,周天鸿.以重复序列为靶位点的鳜鱼多位点基因打靶载体的构建[J].中国水产科学,2005,12(4):377-382.
作者姓名:唐冬生  严霞  李芳  张细权  蒋泓  于辉  高东  李月琴  周天鸿
作者单位:1. 佛山大学,生命科学学院,广东,佛山,528000;暨南大学,生命科学与技术学院,广东,广州,510632
2. 佛山大学,生命科学学院,广东,佛山,528000
3. 华南农业大学,动物科学学院,广东,广州,510642
4. 暨南大学,生命科学与技术学院,广东,广州,510632
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30170737,30470978),广东省自然科学基金资助项目(04011645).~~
摘    要:以鳜鱼(Siniperca chuatsi)为研究对象,以其重复的rRNA基因间的间隔序列为靶位点构建多位点基因打靶载体,为建立体内多位点基因打靶技术获得关键材料。先构建含TK和Neo基因的通用打靶载体pCTKNeo。采用LA Taq高保真酶扩增获得左、右同源重组引导臂HRDS1、HRDS2,经T质粒克隆后,分别插入到pCTKNeo载体Neo基因的上下游,构建成鳜鱼专用的多位点打靶载体pCTKNeo-HRDS1/2。同样将干扰素基因hIFN插入到pCTKNeo-HRDS1/2载体的Neo基因与HDRS2之间。每次克隆均经PCR、酶切和测序等鉴定DNA片段的插入及插入方向,最终构建成多位点基因打靶载体pCTKNeo-HRDS1/2-hIFN。目前的基因打靶技术存在打靶效率低、安全性等问题,以重复序列为靶位点的多位点基因打靶技术将部分解决这些问题。

关 键 词:基因打靶  多基因座  载体  重复序列  鳜鱼
文章编号:1005-8737-(2005)04-0377-06
修稿时间:2004年12月10

Construction of vector of multiple locus gene targeting on repetitive sequences of Siniperca chuatsi
TANG Dong-sheng,YAN Xia,LI Fang,ZHANG Xi-quan,JIANG Hong,YU Hui,GAO Dong,LI Yue-qin,ZHOU Tian-hong.Construction of vector of multiple locus gene targeting on repetitive sequences of Siniperca chuatsi[J].Journal of Fishery Sciences of China,2005,12(4):377-382.
Authors:TANG Dong-sheng  YAN Xia  LI Fang  ZHANG Xi-quan  JIANG Hong  YU Hui  GAO Dong  LI Yue-qin  ZHOU Tian-hong
Institution:TANG Dong-sheng~
Abstract:
Keywords:gene targeting  multiple locus  vector  repetitive sequence  Siniperca chuatsi
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