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吉富罗非鱼钙敏感受体基因的克隆、表达与其参与调控细胞凋亡的机制
引用本文:李连歌,曹哲明,陶易凡,张丽,马俊蕾,李鸣霄,包景文,朱昊俊,徐跑,强俊.吉富罗非鱼钙敏感受体基因的克隆、表达与其参与调控细胞凋亡的机制[J].中国水产科学,2021,28(9):1129-1140.
作者姓名:李连歌  曹哲明  陶易凡  张丽  马俊蕾  李鸣霄  包景文  朱昊俊  徐跑  强俊
作者单位:南京农业大学无锡渔业学院, 江苏 无锡 214081;中国水产科学研究院淡水渔业研究中心, 农业农村部淡水渔业与种质资源利用重点实验室, 江苏 无锡 214081;南京农业大学无锡渔业学院, 江苏 无锡 214081 ;中国水产科学研究院淡水渔业研究中心, 农业农村部淡水渔业与种质资源利用重点实验室, 江苏 无锡 214081
基金项目:国家自然科学基金项目(32002363); 中国水产科学研究院基本科研业务费项目(2020TD37, 2019ZY19, 2019JBFC01).
摘    要:钙敏感受体(calcium-sensing recceptor, CaSR)在 Ca2+ 刺激下可参与调控细胞凋亡等生理过程, 在机体适应逆境胁迫中发挥重要作用。为研究吉富罗非鱼(Genetically Improved Farmed Tilapia, GIFT)CaSR 基因的特点及其在缺氧胁迫下参与细胞凋亡的调控机制。本研究利用 RT-PCR 技术克隆了吉富罗非鱼 CaSR cDNA 全长序列, 利用 qRT-PCR 技术分析了该基因在不同组织中的表达模式, 并进一步检测了缺氧胁迫下(0.55 mg/L)肝脏中该基因和细胞凋亡相关基因 mRNA 的表达变化, 同时利用 ELISA 法检测了肝脏中抗氧化酶活性的变化, 以及通过 HE 和 TUNEL染色法分别观察了肝细胞的形态变化和凋亡情况。结果显示, 吉富罗非鱼 CaSR cDNA序列全长 3265 bp, 包括 21 bp 5′非编码区、2823 bp 开放阅读框和 421 bp 3′非编码区, 编码 940 个氨基酸。CaSR 基因 mRNA 在不同组织中均有表达, 其中肌肉中表达量最高, 肾脏次之; 组织切片观察发现缺氧可导致肝脏组织结构损伤, 促进肝细胞凋亡; 与对照组(5.0 mg/L)相比, 缺氧可增强 SOD、CAT 和 GSH-Px 抗氧化酶活性, 上调 CaSR mRNA 的表达, 并引起 Bcl-2、Caspase-3 和 P53 凋亡基因 mRNA 的表达变化。研究结果表明, CaSR 可能通过介导 Ca2+调控细胞凋亡, 从而参与吉富罗非鱼的缺氧应对机制。

关 键 词:吉富罗非鱼    钙敏感受体    基因克隆    缺氧胁迫    细胞凋亡

Cloning and expression of the calcium-sensing receptor gene in Ge-netically Improved Farmed Tilapia and its mechanism of regulating apoptosis
LI Liange,CAO Zheming,TAO Yifan,ZHANG Li,MA Junlei,LI Mingxiao,BAO Jingwen,ZHU Haojun,XU Pao,QIANG Jun.Cloning and expression of the calcium-sensing receptor gene in Ge-netically Improved Farmed Tilapia and its mechanism of regulating apoptosis[J].Journal of Fishery Sciences of China,2021,28(9):1129-1140.
Authors:LI Liange  CAO Zheming  TAO Yifan  ZHANG Li  MA Junlei  LI Mingxiao  BAO Jingwen  ZHU Haojun  XU Pao  QIANG Jun
Abstract:
Keywords:
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