黄颡鱼LRH-1基因的分离和表达

肝受体类似物(Liver receptor homolog-1,LRH-1)是核受体家族Ftz-F1中一个亚家族成员,由于其在哺乳类卵巢中的高表达而被认为在卵巢类固醇合成的调控中起着一定的作用.本研究使用RT-PCR、RACE法分离到了黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)肝受体类似物基因(LRH-1)以及一个无活性的LRH-1' cDNA.LRH-1 cDNA全长1 945 bp,包括γ'非翻译区207bp,3'非翻译区238 bp,开放阅读框1 500 bp,编码500个氨基酸,推算的蛋白分子量为57.19 kD.LRH-1'全长1 663 bp,5'非翻译区283 bp,3'非翻译区330 bp,开放阅读框1 050 bp,编码350个氨基酸,推算的蛋白分子量为39.7 kD.与LRH-1相比,LRH-1'缺少存在于基因5'端的锌指结构和3'端起转录激活作用的AF-2基序.不同动物LRH-1氨基酸序列比对结果表明,黄颡鱼LRH-1和其他动物的LRH-1相似性为79%～85%,和其他动物的类固醇生成因子(SF-1)相似性为59%～66%.系统发育树显示,Ftz-F1分为两大支,一支包括鱼类SF-1;另一支又有2个分支,分别包含其他动物的SF-1和所有动物的LRH-1,在LRH-1分支中鱼类LRH-1单独为一小支.以β-actin为内标的荧光实时定量.RT-PCR结果显示,LRH-1在雌、雄黄颡鱼脑、肝、肾、性腺均有表达,以肝脏的表达量为最高,雌鱼各组织的表达量均比雄鱼高,其中肝脏和性腺差异明显(P＜0.05);在卵巢的不同发育阶段,该基因的表达量也不尽相同,Ⅲ期卵巢表达量最高,明显高于Ⅴ期(P＜0.05),Ⅴ期又明显高于Ⅱ、Ⅳ和Ⅵ期(P＜0.05);注射催产素促黄体释放激素类似物(LRH-A)12 h后,LRH-1在脑的表达量没明显变化,在肝脏和肾脏的表达量明显增加,而在卵巢的表达量明显下降.

Isolation and expression pattern of LRH-1 in yellow catfish (Pelteobagrus fulvidraco)