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黑斑原鮡AFLP分析体系的建立
引用本文:郭宝英,谢从新,祁鹏志,吴常文.黑斑原鮡AFLP分析体系的建立[J].水生态学杂志,2011,32(3):127-131.
作者姓名:郭宝英  谢从新  祁鹏志  吴常文
作者单位:1. 浙江海洋学院海洋科学学院浙江省海洋养殖装备与工程技术重点实验室,浙江舟山316004;华中农业大学水产学院,湖北武汉430072
2. 华中农业大学水产学院,湖北武汉,430072
3. 浙江省大海洋科技有限公司,浙江舟山,316004
4. 浙江海洋学院海洋科学学院浙江省海洋养殖装备与工程技术重点实验室,浙江舟山,316004
基金项目:国家自然科学基金项目(面上项目,重点项目,重大项目)
摘    要:建立黑斑原鮡(Glyptosternum maculatum)AFLP反应体系,对DNA提取、双酶切、连接、预扩增、选择性扩增和银染效果进行了探索。结果表明,40μLTaqI酶切体系中65℃先酶切2h,EcoRI酶切和连接同时进行,EcoRI酶和T4DNA连接酶的用量均以2U为宜,温度与时间分别为37℃和3h,连接产物稀释10倍作为预扩增的模板。利用这种优化的反应体系,5对选择性扩增引物组合表现出较高的稳定性、清晰度和多态性,它们分别是:E-AAC/T-AAT、E-AAC/T-AAG、E-AAG/T-ACA、E-AAG/T-AAT和E-AAT/T-AGA。5对引物组合对96个样本扩增,共得到332条清晰可辨、可重复的条带,平均每对引物组合扩增出66.4条带,其中51条带是多态的。将AFLP技术用于黑斑原鮡的研究,通过优化体系的建立,为其种质资源的研究奠定基础。

关 键 词:AFLP  黑斑原鮡  反应体系
收稿时间:7/28/2010 3:35:40 PM
修稿时间:2010/12/24 0:00:00

The Construction of AFLP Analysis System in Glyptosternum maculatum
GUO Bao ying,XIE Cong xin,QI Peng zhi and Wu Chang wen.The Construction of AFLP Analysis System in Glyptosternum maculatum[J].Journal of Hydroecology,2011,32(3):127-131.
Authors:GUO Bao ying  XIE Cong xin  QI Peng zhi and Wu Chang wen
Institution:Marine Science College, Zhejiang Ocean University,College of Fisheries, Huazhong Agricultural University,Marine Science College, Zhejiang Ocean University,Marine Science College, Zhejiang Ocean University
Abstract:
Keywords:AFLP  Glyptosternum maculatum  reaction system  silver staining
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